Rozdiel medzi Bradfordovým a Lowry Proteinovým testom

kľúčový rozdiel medzi testom bradford a lowry proteín je to Bradfordský proteínový test je založený na posunu absorbancie farbiva Coomassie brilantnej modrej G-250, zatiaľ čo Lowryho proteínový test je založený na reakcii iónov medi (Cu +) produkovaných oxidáciou peptidových väzieb s Folin-Ciocalteu činidlom.

Test je analytická technika, ktorá pomáha charakterizovať hlavné funkčné komponenty vzorky. Preto môže byť test kvalitatívny alebo kvantitatívny. Veľa odborov vrátane laboratórneho lekárstva, farmakológie, environmentálnej biológie, molekulárnej biológie, biochémie a imunológie používa tento druh testov rutinne. Stanovenie proteínov Bradford a Lowry sú dva biochemické testy, ktoré určujú koncentráciu proteínu v roztoku vzorky. Oba testy používajú kolorimetrické techniky na získanie výsledkov.

OBSAH

1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je analýza proteínov Bradford
3. Čo je test Lowry Protein Assay
4. Podobnosti medzi testom Bradford a Lowry Protein Assay
5. Porovnanie vedľa seba - Bradford vs Lowry Protein Assay v tabuľkovej forme
6. Zhrnutie

Čo je test na proteín Bradford?

Stanovenie proteínov Bradford je rýchly spektroskopický analytický postup na analýzu proteínov. Vykazuje vysokú presnosť pri meraní koncentrácie proteínu v roztoku. Marion Bradford zaviedol tento postup v roku 1976. V tomto teste je celková reakcia založená na nameranom zložení proteínov v aminokyselinách. Inými slovami, Bradfordov proteínový test je kolorimetrický test. Používa farbivo Coomassie brilantné modré. Preto tento kolorimetrický proteínový test závisí od posunu absorbancie farbiva. Coomassie brilantná modrá G-250 existuje v troch formátoch: katiónová (červená), aniónová (modrá) a neutrálna (zelená). Počas kyslých podmienok sa červená forma farbiva zmení na modrú. Potvrdzuje väzbu proteínu. Ak proteín nie je prítomný, roztok môže zostať v hnedej farbe.

Obrázok 01: Stanovenie proteínov Bradford

Bradfordský proteínový test sa líši od iných proteínových testov, pretože je menej citlivý na interferencie rôznych chemických zlúčenín prítomných v proteínovom roztoku. Tieto zlúčeniny zahŕňajú sodík, draslík, glukózu a sacharózu atď.

Čo je Lowry Protein Assay?

Test s nízkym obsahom bielkovín je biochemický test, ktorý sa používa na stanovenie celkovej hladiny proteínu v roztoku. Oliver H. Lowry je osoba, ktorá vyvinula toto činidlo v roku 1940. Postup zobrazuje celkovú koncentráciu proteínu v roztoku pomocou zmeny farby, ktorá je úmerná koncentrácii proteínu v roztoku. Preto je to tiež kolorimetrický proteínový test.

Základom tohto postupu je reakcia medzi iónmi medi (Cu +), ktorá vzniká oxidáciou peptidových väzieb a Folin-Ciocalteuovho činidla. Toto činidlo tiež obsahuje kyselinu fosfomolybdénovú a kyselinu fosforečnú-volfrámovú. Mechanizmus reakcie testu s Lowryho proteínom však nie je dobre známy. Zahŕňa však oxidáciu zvyškov cysteínu, tryptofánu a tyrozínu redukciou Folin-Ciocalteuovho činidla..

Obrázok 02: Test na bielkoviny Lowry

Cysteínové zvyšky prispievajú k absorbancii pozorovanej pri stanovení Lowryho proteínu a výsledkom reakcie je brilantná modrá molekula; heteropolymolybdénová modrá. Redukcia tejto molekuly sa meria absorbanciou pri 660 nm. Koncentrácia cysteínových a tryptofánových zvyškov, ktoré znižujú Folin-Ciocalteuovo činidlo, teda odvodzuje celkovú koncentráciu proteínu v roztoku..

Aké sú podobnosti medzi Bradfordovým a Lowry Protein Assay?

• Stanovenie proteínov v roztoku určuje Bradford a Lowry.
• Obe metódy sú kolorimetrickými metódami.
• Citlivosť oboch metód je tiež vysoká.

Aký je rozdiel medzi testom Bradford a Lowry Protein Assay?

Stanovenie proteínov Bradford a Lowry sú dva typy testov, ktoré určujú koncentráciu proteínu v roztoku. Bradfordský proteínový test sa spolieha na posun absorbancie farbiva Coomassie brilantnej modrej G-250, zatiaľ čo Lowryho proteínový test závisí na reakcii iónov medi produkovaných oxidáciou peptidových väzieb s činidlom Folin-Ciocalteu. Toto je kľúčový rozdiel medzi testom Bradfordovej a Lowryho. Stanovenie bielkovín v Bradforde trvá 15 minút, kým sa dosiahne výsledok, zatiaľ čo stanovenie bielkovín v Lowery trvá 40 až 60 minút. To je ďalší rozdiel medzi testom Bradfordovej a Lowryho. Ďalej, Bradfordov proteínový test závisí od zloženia aminokyselín, zatiaľ čo test Lowryho proteínu je čiastočne závislý od zloženia aminokyselín. Preto je to tiež rozdiel medzi Bradfordovým a Lowryho proteínovým testom.

Nižšie uvedené informácie poskytujú viac podrobností o rozdiele medzi Bradfordovým a Lowryho proteínovým testom.

Zhrnutie - Bradford vs Lowry Protein Assay

Test je analytická technika použitá na charakterizáciu hlavnej funkčnej zložky vzorky. Bradford a Lowry proteínový test sú dva typy proteínových testov, ktoré fungujú pri kolorimetrických technikách. Stanovenie proteínov v roztoku určuje Bradford aj Lowry proteín. Kľúčový rozdiel medzi testom Bradford a Lowry Protein Assay však spočíva v kolorimetrickej technike, ktorú používajú. Bradfordský proteínový test používa Coomassie brilantnú modrú G-250, zatiaľ čo proteínový test Lowry využíva ióny medi (Cu +) a Folin-Ciocalteuovo činidlo. Ďalej Bradfordova metóda poskytuje rýchle výsledky ako test Lowryho proteínu. Obidve metódy sú však vysoko citlivé metódy a podliehajú interferenciám rôznych látok.

referencie:

1. „Kanadský denník botaniky.“ Kanadský denník botaniky - 60 (7): 1046 - PDF, dostupný tu.
2. „Chemická analýza proteínov“. Thermo Fisher Scientific - USA, k dispozícii tu.

S láskavým dovolením:

1. „Bradfordský proteínový test“ Helito - vlastná práca (CC BY-SA 4.0) prostredníctvom Commons Wikimedia