Rozdiel medzi priamou a nepriamou imunofluorescenciou

kľúčový rozdiel medzi priamou a nepriamou imunofluorescenciou je to, že priama imunofluorescencia používa jednu protilátku, ktorá pôsobí proti cieľovému cieľu, zatiaľ čo nepriama imunofluorescencia používa dve protilátky na označenie cieľového cieľa.

Imunofluorescencia alebo bunkové zobrazovanie je technika, ktorá sa používa na označenie špecifického cieľového antigénu fluoroforom. Fluorofor je tu fluorescenčná chemická zlúčenina, ktorá môže po excitácii svetla znova vyžarovať svetlo. Keď sa fluorofor viaže na cieľový antigén, umožňuje detekciu cieľovej molekuly vo vzorke. Aby sa ďalej opísal, keď sa antigén viaže so špecifickou protilátkou, môže sa konjugovať s fluoroformi. Preto je ľahké zistiť prítomnosť cieľového antigénu vo vzorke pri pozorovaní pod fluorescenčným mikroskopom.

Okrem toho existujú dva typy imunofluorescencie; priama a nepriama imunofluorescencia. Rozdiel medzi priamou a nepriamou imunofluorescenciou spočíva hlavne v počte použitých protilátok a konjugácii fluoroforov. To znamená, že pri priamej imunofluorescencii sa fluorofor priamo konjuguje s primárnou protilátkou, zatiaľ čo pri nepriamej imunofluorescencii sa fluoroforový konjugát so sekundárnou protilátkou.

OBSAH

1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je priama imunofluorescencia
3. Čo je nepriama imunofluorescencia
4. Podobnosti medzi priamou a nepriamou imunofluorescenciou
5. Porovnanie bok po boku - priame verzus nepriame imunofluorescencia v tabuľkovej forme
6. Zhrnutie

Čo je priama imunofluorescencia?

Imunofluorescencia využíva protilátky na detekciu špecifických cieľových antigénov. Priama imunofluorescencia je jedným z dvoch typov imunofluorescencie. Pri priamej imunofluorescencii jedna protilátka (primárna protilátka) zahŕňa a fluorofor sa priamo konjuguje s primárnou protilátkou. Po naviazaní protilátky na cieľový antigén fluorofor emituje fluorescenciu, ktorú je možné zistiť fluorescenčným mikroskopom.

Obrázok 01: Priama imunofluorescencia

Priama imunofluorescencia je však nákladná metóda, pretože primárne konjugované protilátky sú nákladné v porovnaní so sekundárnymi protilátkami. Neznamená to však ďalší krok, teda kratšiu techniku. Nešpecifické väzby sú navyše redukované pri priamej imunofluorescencii. Preto je krížová reaktivita druhov nízka. Pri detekcii je však citlivosť priamej imunofluorescencie v porovnaní s nepriamou imunofluorescenciou slabá .

Čo je nepriama imunofluorescencia?

Nepriama imunofluorescencia je druhým typom imunofluorescencie, ktorá pri označovaní cieľového antigénu zahŕňa dva typy protilátok, ako sú primárne a sekundárne protilátky. Pri tomto spôsobe sa fluorofor konjuguje so sekundárnou protilátkou. Táto technika teda zahŕňa ďalší krok.

Obrázok 02: Imunofluorescencia

Citlivosť je však pri tejto metóde vysoká, pretože niekoľko fluoroforov môže byť konjugovaných so sekundárnymi protilátkami, čo uľahčuje detekciu. Nepriama imunofluorescencia je navyše lacnejšia v dôsledku skutočnosti, že konjugácia sekundárnych protilátok je lacnejšia a ľahšia. V porovnaní s priamou imunofluorescenciou je druhová krížová reaktivita pri nepriamej metóde vysoká.

Aké sú podobnosti medzi priamou a nepriamou imunofluorescenciou?

• Sú to dva typy imunofluorescenčnej techniky.
• Primárne protilátky a fluorofor zahŕňajú obidve metódy.
• Reakcia antigén-protilátka sa tiež vyskytuje v oboch metódach.
• Priama aj nepriama imunofluorescencia využíva fluorescenčný mikroskop na detekciu antigénu.

Aký je rozdiel medzi priamou a nepriamou imunofluorescenciou?

Imunofluorescencia môže byť priama alebo nepriama na základe konjugácie fluoroforu s použitými protilátkami. Pri priamej imunofluorescencii sa fluorofor konjuguje s primárnou protilátkou, ktorá je jednoduchou protilátkou, ktorá sa podieľa na tejto technike. Na rozdiel od toho, v nepriamej imunofluorescencii sa fluorofor konjuguje so sekundárnou protilátkou, ktorá je jednou z dvoch typov protilátok, ktoré sa podieľajú na technike. Hlavným rozdielom medzi priamou a nepriamou imunofluorescenciou je teda typ protilátky, ktorý sa konjuguje s fluoroforom.

Nasledujúci infographic poskytuje porovnanie bok po boku rozdielu medzi priamou a nepriamou imunofluorescenciou.

Zhrnutie - priame verzus nepriame imunofluorescencia

Imunofluorescencia je technika, ktorá sa používa na detekciu prítomnosti špecifických antigénov vo vzorke. Táto technika používa špecifické protilátky. Preto sa protilátky konjugujú s fluoroformi, aby ich detegovali pomocou fluorescenčného mikroskopu. Okrem toho existujú dva typy imunofluorescencie, a to priama a nepriama imunofluorescencia. Priama imunofluorescencia zahŕňa jednu protilátku a fluorofor priamo konjugovaný s touto protilátkou. Nepriama imunofluorescencia zahŕňa dve protilátky; primárna a sekundárna a fluorofor konjugovaná so sekundárnou protilátkou. Pretože sa niekoľko sekundárnych protilátok môže viazať s primárnou protilátkou a niekoľko fluoroforov sa môže konjugovať so sekundárnymi protilátkami, nepriama imunofluorescencia je citlivejšou metódou ako priama metóda. Nepriama metóda je navyše lacnejšia ako metóda priama. To je rozdiel medzi priamou a nepriamou imunofluorescenciou.

referencie:

1. "imunofluorescenčné". Wikipedia, Wikimedia Foundation, 19. augusta 2018. K dispozícii tu 

S láskavým dovolením:

1. "HSP IF IgA" Autor: Emmanuelm, en.wikipedia, (CC BY 3.0), prostredníctvom Commons Wikimedia.
2. „Imunofluorescencia“ Westhayl618 - vlastné dielo (CC BY-SA 4.0) prostredníctvom Commons Wikimedia