DNA ligáza a DNA polymeráza sú dôležité enzýmy podieľajúce sa na replikácii DNA a mechanizmoch opravy DNA organizmov. DNA ligáza je zodpovedná za spojenie DNA fragmentov katalyzáciou tvorby fosfodiesterových väzieb medzi nukleotidmi. DNA polymeráza je zodpovedná za syntézu DNA z jej stavebných blokov (nukleotidov) pomocou templátovej DNA. Toto je kľúčový rozdiel medzi DNA ligázou a DNA polymerázou.
OBSAH
1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je DNA ligáza
3. Čo je DNA polymeráza
4. Porovnanie bok po boku - DNA Ligase vs DNA Polymerase
5. Zhrnutie
DNA ligáza je enzým, ktorý katalyzuje tvorbu fosfodiesterovej väzby medzi 3'-OH a 5'-PO4 skupiny nukleotidov a uľahčuje spájanie fragmentov DNA. Je tiež známy ako molekulárny prešívací materiál. Táto schopnosť umožňuje vyplnenie medzier alebo zárezov DNA a spojenie fragmentov Okazaki vytvorených počas replikácie DNA. DNA ligázy sú vysoko užitočné v technológii rekombinantnej DNA na produkciu rekombinantných molekúl DNA. DNA ligáza spája požadovanú DNA s vektorovou DNA. Preto je pre organizmy dôležitým enzýmom.
Enzým DNA ligázy závisí od kofaktora a Mg2+ ióny pre svoju funkciu. V DNA ligázach pomáhajú dva kofaktory. NAD+ pôsobí ako kofaktor pre bakteriálne DNA ligázy, zatiaľ čo ATP často pôsobí ako vírus kofaktorov a eukaryotické DNA ligázy. Akcia eukaryotickej DNA ligázy sa dokončí tromi hlavnými krokmi.
Krok 01. DNA ligáza atakuje molekulu ATP a uvoľňuje pyrofosfát (dve fosfátové skupiny) a AMP a vytvára ligázovo-adenylátový medziprodukt väzbou kovalentne s výsledným AMP.
Krok 02: Vytvorený enzýmový medziprodukt AMP prenáša AMP na 5 'fosfát niklu a vytvára DNA - adenylát (5'-fosfátový kyslík reťazca DNA útočí na fosfor medzi ligázou a adenylátovým medziproduktom).
Krok 03: DNA ligáza katalyzuje útok 3'-OH niklu na DNA-adenylát, aby sa pripojila k polynukleotidom a uvoľňuje AMP.
DNA ligázy sa obvykle izolujú z bakteriofágu T4 a vo veľkej miere sa používajú v technológii rekombinantnej DNA.
Obrázok 01: DNA ligáza pri oprave Nickom
DNA polymeráza je všadeprítomný enzým prítomný vo všetkých organizmoch podieľajúcich sa na syntéze DNA a replikácii genómu. Genetické informácie prechádzajú z rodičov na potomkov pomocou DNA polymeráz. Katalyzuje syntézu novej DNA komplementárnej k existujúcej DNA. DNA polymeráza pridáva nukleotidy (stavebné bloky nukleových kyselín) do 3 'OH skupiny primérovej sekvencie a pokračuje v formovaní vlákna v smere 5'. Väčšina DNA polymeráz má 5 'až 3' polymerázovú aktivitu a 3 'až 5' exonukleázovú aktivitu na korekciu.
Prokaryotické DNA polymerázy sú opísané v piatich hlavných skupinách. Eukaryoty obsahujú najmenej 16 rôznych DNA polymeráz. Všetky tieto DNA polymerázy sú zoskupené do siedmich rodín, konkrétne A, B, C, D, X, Y a RT (Reverzná transkriptáza)..
Obrázok 02: Replikácia DNA riadená DNA polymerázou
DNA ligáza vs. DNA polymeráza | |
DNA ligáza je enzým, ktorý katalyzuje tvorbu fosfodiesterových väzieb medzi nukleotidmi a spája fragmenty DNA dohromady. | DNA polymeráza je enzým, ktorý katalyzuje syntézu DNA pomocou nukleotidov. |
Úloha v replikácii DNA | |
DNA ligáza je ďalší enzým pri replikácii DNA, ktorý spája fragmenty Okazaki. | DNA polymeráza je hlavným enzýmom pri replikácii DNA. |
požiadavky | |
Závisí to od Mg2+ ióny a ATP / NAD+ kofaktory | Závisí to od templátu, nukleotidov, primerov a Mg2+. |
funkcie | |
DNA ligáza je dôležitá pre rekombináciu DNA, opravu DNA a replikáciu DNA. | DNA polymeráza je dôležitá pre replikáciu DNA, opravu DNA a technológiu rekombinácie DNA. |
DNA ligáza je dôležitý enzým, ktorý je potrebný na spojenie DNA fragmentov fosfodiesterovými väzbami. DNA polymeráza je hlavným enzýmom dôležitým pre novú syntézu DNA. Kľúčový rozdiel medzi DNA ligázou a DNA polymerázou je ich funkcia. Oba enzýmy sú však nevyhnutné na opravu DNA, replikáciu DNA a technológiu rekombinantnej DNA.
referencie:
Rossi, R., A. Montecucco, G. Ciarrocchi a G. Biamonti. „Funkčná charakterizácia T4 DNA ligázy: nový pohľad na mechanizmus účinku.“ Výskum nukleových kyselín. U.S. National Library of Medicine, 1. júna 1997. Web. 11. marca 2017
Martin, Ina V. a Stuart A. MacNeill. „ATP-dependentné DNA ligázy.“ Genómová biológia. BioMed Central, 2002. Web. 11. marca 2017
Garcia-Diaz, Miguel a Katarzyna Bebenek. "Viacnásobné funkcie DNA polymeráz." Kritické prehľady v prírodných vedách. Americká národná lekárska knižnica, marec 2007. Web. 11. marca 2017
S láskavým dovolením:
1. „Ligase nick repair mecanism“ od Jrmcnall - ChemDraw (CC BY-SA 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia
2. „Replikačné zariadenie Phage T7“ Autor: Danykl - Vlastná práca (CC BY-SA 4.0) cez Commons Wikimedia