Rozdiel medzi forwardovým a reverzným základným náterom

Kľúčový rozdiel - vpred vs reverzný primer
 

Polymerázová reťazová reakcia (PCR) je metóda amplifikácie DNA, ktorá sa používa v molekulárnych biologických aplikáciách. Je to bežne používaná technika, ktorá umožňuje miliónom až miliardám kópií DNA sekvencie, ktorá sa obzvlášť zaujíma. Je to in vitro metóda vykonaná v laboratóriách. Technika PCR je úplne závislá od komerčne vyrábanej DNA polymerázy nazývanej Taq polymeráza. Vyžaduje tiež niekoľko ďalších komponentov a správnu údržbu teploty. Jednou z dôležitých súčastí sú priméry. Priméry sú krátke sekvencie DNA špecificky navrhnuté pre cieľovú sekvenciu DNA. Zvyčajne majú dĺžku okolo 20 nukleotidov. Taq polymeráza katalyzuje pridanie nukleotidov do už existujúcej nukleotidovej sekvencie. Priméry sa teda používajú ako východiskové body syntézy nových vlákien. Polymeráza Taq funguje iba v smere 5 'až 3', preto sa syntéza DNA uskutočňuje v rovnakom smere 5 'až 3'. Pretože DNA je dvojvláknová, sú pri PCR potrebné dva typy primérov. Sú známe ako forward primer a reverzný primer. Forwardové a reverzné priméry sa označujú na základe smeru predĺženia priméru v DNA, keď dôjde k syntéze DNA. Dopredný primér sa aneluje s antisense vláknom DNA a iniciuje syntézu kladného vlákna génu v smere 5 'až 3'. Reverzný primér sa hybridizuje so sense vláknom a iniciuje syntézu komplementárneho vlákna kódujúceho vlákna; ktorý je reťazcom génu do 5'-3 'smeru. To je kľúčový rozdiel medzi prednými a spätnými primermi.

OBSAH

1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je forwardový primer
3. Čo je reverzný primer
4. Podobnosti medzi forwardovým a reverzným základným náterom
5. Porovnanie bok po boku - forwardový a reverzný primer v tabuľkovej forme
6. Zhrnutie

Čo je forwardový primer?

Orientácia vpred je syntéza kódujúceho vlákna alebo sense vlákna génu. Taq polymeráza katalyzuje syntézu nového vlákna v smere 5 'až 3'. K syntéze kódujúceho vlákna dochádza, keď primer nasedá s nekódujúcim alebo antisense reťazcom a predlžuje sa v smere 5 'až 3'.

Obrázok 01: Predné a zadné primery

Primér, ktorý aneluje s antisense vláknom alebo nekódujúcim vláknom alebo templátovým vláknom, je známy ako priamy primér, pretože priamy primér pôsobí ako východiskový bod pre syntézu kódovania alebo pozitívneho vlákna génu. Predný primer má krátku nukleotidovú sekvenciu, ktorá je komplementárna s 3 'lemujúcim koncom antisense vlákna. Hybridizuje s antisense vláknom a uľahčuje Taq polymeráze pridať nukleotidy, ktoré sú komplementárne k templátovému vláknu..

Čo je reverzný primer?

Reverzný primér je krátka sekvencia DNA, ktorá sa hybridizuje s 3 'koncom sense vlákna alebo kódujúceho vlákna. Reverzný primer slúži ako východiskový bod na syntézu komplementárneho vlákna kódujúcej sekvencie alebo nekódujúcej sekvencie. Reverzný primer je navrhnutý ako doplnok k 3 'koncu kódovacieho vlákna. Preto nasedá s lemujúcim 3 'koncom kódovacieho vlákna a umožňuje polymerizácii Taq syntetizovať antisense vlákno alebo templátové vlákno. Pretože jeho orientácia je obráteným spôsobom, je tento primer označený ako reverzný primer.

Reverzné aj forwardové primery sú dôležité pre produkciu miliónov až miliárd kópií konkrétnych regiónov DNA, ktoré sú cielené alebo zainteresované.

Aké sú podobnosti medzi forwardovým a reverzným základným náterom?

• Predné aj spätné priméry sú vyrobené z oligonukleotidov.
• Predný aj spätný primér majú krátku nukleotidovú sekvenciu komplementárnu k okrajovým koncom dvojitých reťazcov DNA.
• Ako forwardové, tak aj reverzné priméry zvyčajne pozostávajú z 20 nukleotidov.
• Vpredné aj reverzné priméry sa používajú pri polymerázových reťazových reakciách.
• Predné aj spätné primery sa syntetizujú komerčne.
• Predné aj spätné primery sú stabilné pri teplote a zvyčajne majú podobné Tm.
• Ako predný, tak aj spätný primér sú žíhané cieľovými sekvenciami DNA.
• Predné aj spätné primery sú navrhnuté podľa PCR reakcií.
• Ako východiskové, tak aj reverzné priméry sa používajú ako východiskové body pre amplifikáciu DNA.
• Reverzné aj forwardové priméry sú dôležité pre produkciu miliónov kópií konkrétnych regiónov cieľových alebo zainteresovaných sekvencií DNA.

Aký je rozdiel medzi forwardovým a reverzným základným náterom?

Predný primer a reverzný základný náter
Predný primer je krátka sekvencia DNA, ktorá hybridizuje s 3 'koncom nekódujúceho alebo templátového vlákna génu a slúži ako východiskový bod na syntézu kódujúcej sekvencie..	Reverzný primer je krátka sekvencia DNA, ktorá hybridizuje s 3 'koncom kódovacieho alebo nontemplate vlákna a slúži ako východiskový bod na syntézu nekódujúcej sekvencie..
Žíhacia vetva
Predné žíhané primérové ​​vlákno so šnúrkou.	Reverzné primérové ​​žíhanie s nontemplate vláknom.
Výsledná nová sekvencia
Predný primer uľahčuje syntézu kódujúcej sekvencie.	Reverzný primer uľahčuje syntézu nekódujúcej sekvencie.

Zhrnutie - Poslať ďalej vs reverzný primer

Do PCR techniky sú zapojené dva typy primérov. Sú to primery vpred a vzad. Na základe predĺženia priméru pri novej syntéze DNA reťazca sú tieto priméry označené alebo pomenované. Taq polymeráza syntetizuje novú DNA v orientácii 5 'na 3'. Preto sú priméry navrhnuté ako komplementárne k 3 'koncom dvojitých vlákien. Predný primer, ktorý sa predlžuje v smere 5 'až 3', hybridizuje s 3 'koncom antisense alebo templátu alebo nekódujúcej sekvencie. Slúži ako východiskový bod na syntézu kódovacej sekvencie. Reverzný primer, ktorý sa predlžuje v smere 5 'až 3', hybridizuje s 3 'koncom kódovania alebo s nontemplate alebo sense vláknom. Slúži ako východiskový bod na syntetizáciu nekódovacej sekvencie. Toto je rozdiel medzi predným a spätným primerom.

referencie:

1. „Primer (Molekulárna biológia).“ Wikipedia, Wikimedia Foundation, 20. februára 2018. K dispozícii tu 
2. „Polymerázová reťazová reakcia (PCR).“ Khan Academy. K dispozícii tu 

S láskavým dovolením:

1.'Primers RevComp Melted2'By Richard Wheeler (Zephyris) - vlastná práca, (CC BY-SA 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia