Rozdiel medzi gélovou elektroforézou a SDS

Kľúčový rozdiel - gélová elektroforéza verzus SDS
 

Gélová elektroforéza je technika, ktorá oddeľuje makromolekuly v elektrickom poli. V molekulárnej biológii je bežnou metódou separovať DNA, RNA a proteíny zo zmesí podľa ich molekulovej veľkosti. SDS Page je typ gélovej elektroforézy, ktorá sa používa na oddelenie proteínov od proteínovej zmesi na základe ich veľkosti. Gélová elektroforéza je termín používaný na označenie normálnej techniky použitej pri separácii DNA, RNA a proteínov zatiaľ čo SDS Page je jeden typ gélovej elektroforézy. Toto je kľúčový rozdiel medzi gélovou elektroforézou a SDS.

OBSAH
1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je gélová elektroforéza
3. Čo je to karta SDS
4. Porovnanie bok po boku - gélová elektroforéza verzus SDS
5. Zhrnutie

Čo je gélová elektroforéza?

Gélová elektroforéza je bežná technika používaná v laboratóriách na oddelenie nabitých molekúl, ako sú DNA, RNA, proteíny, atď. Od ich zmesí. Gél sa používa v gélovej elektroforéze. Pôsobí ako molekulové sito. Pri gélovej elektroforéze sa používajú dva typy gélov, a to agaróza a polyakrylamid. Výber gélu a gélového preparátu sú dôležitými faktormi, ktoré treba brať do úvahy pri gélových elektroforézach, pretože veľkosť pórov gélu by sa mala starostlivo manipulovať, aby sa molekuly dobre separovali pomocou gélovej elektroforézy. Gélová elektroforéza má elektrické pole pripojené k dvom koncom gélu. Jeden koniec gélu vykazuje kladný náboj, zatiaľ čo druhý koniec je záporne nabitý.

DNA a RNA sú negatívne nabité molekuly. Keď sa vložia do gélu z negatívneho konca gélu a aplikujú sa na elektrické pole, migrujú póry gélu smerom k pozitívne nabitému koncu gélu. Rýchlosť migrácie závisí od náboja a veľkosti molekuly. Menšie molekuly ľahko migrujú cez póry gélu ako väčšie molekuly. Preto menšie molekuly cestujú na veľkú vzdialenosť gélom a väčšie molekuly cestujú na krátku vzdialenosť. Na pozorovanie pohybu molekúl na géli sa používajú špeciálne typy farbív. Elektrické pole sa aplikuje na určité časové obdobie a zastaví sa, aby sa zabránilo strate molekúl a aby sa molekuly udržali v polohe, ktorú prešli. V géli je možné pozorovať rôzne pásy. Tieto pásy predstavujú molekuly rôznych veľkostí. Preto je gélová elektroforéza užitočná na rozlíšenie molekúl podľa ich veľkosti.

Gélová elektroforéza je začlenená do rôznych techník ako preparatívna technika v molekulárnej biológii, ako je PCR, RFLP, klonovanie, sekvenovanie DNA, Southern blotting, mapovanie genómu atď..

Obrázok 01: Elektroforéza na agarózovom géli

Čo je to karta SDS?

Elektroforéza na polyakrylamidovom géli s dodecylsulfátom sodným (SDS Page) je typ gélovej elektroforézy používanej na oddelenie proteínov. Ak sa na separáciu proteínov používa gélová elektroforéza, je potrebné špeciálne ošetrenie, pretože proteíny nie sú záporne nabité ako DNA a RNA a nemigrujú smerom k pozitívnemu alebo negatívnemu koncu. Preto sú proteíny denaturované a potiahnuté negatívnym nábojom pred gélovou elektroforézou. Uskutočňuje sa pomocou detergentu nazývaného dodecylsulfát sodný (SDS). Gélová elektroforéza, pri ktorej sa ako nosné médium používa SDS a polyakrylamidový gél, sa nazýva. Táto technika sa bežne používa v biochémii, genetike, súdnom konaní a molekulárnej biológii.

Počas SDS Page sa proteíny zmiešajú s SDS. SDS rozvíja proteíny do lineárneho tvaru a poťahuje ich negatívnym nábojom úmerným ich molekulovej hmotnosti. V dôsledku negatívneho náboja molekuly proteínu migrujú smerom ku kladnému nábojovému koncu gélu a oddeľujú sa podľa svojich molekulových hmotností. Na SDS Page sa polyakrylamid používa ako pevný nosič pre gél. Skutočná separácia proteínov závisí hlavne od vlastností gélu. Preto by sa mal prípravok polyakrylamidového gélu starostlivo robiť a mali by sa používať správne koncentrácie polyakrylamidu. Polyakrylamidové gély vykazujú vysoké rozlíšenie ako agarózové gély. Preto je SDS Page považovaná za techniku ​​s vysokým rozlíšením na separáciu proteínov.

SDS Page je typ denaturačnej gélovej elektroforézy. V analýze proteínov má hlavné obmedzenie. Pretože SDS denaturuje proteíny pred separáciou, neumožňuje detekciu enzymatickej aktivity, interakcií viažucich proteíny, proteínových kofaktorov atď..

Obrázok 02: Stránka SDS

Aký je rozdiel medzi gélovou elektroforézou a SDS?

Gélová elektroforéza vs SDS
Gélová elektroforéza je metóda uskutočňovaná na oddelenie makromolekúl pomocou elektrického poľa.	SDS Page je technika gélovej elektroforézy s vysokým rozlíšením, ktorá sa používa na separáciu proteínov na základe ich hmotnosti.
Gel Run
Môže sa vykonávať horizontálne alebo vertikálne.	Stránka SDS sa vždy spúšťa vertikálne.
Základ pre oddelenie
K oddeľovaniu dochádza podľa náboja a veľkosti.	K separácii proteínov dochádza podľa hmotnosti a náboja.
Rozhodnutie
Elektroforéza na agarózovom géli má nízku rozlíšenie a elektroforéza na polyakrylamidovom géli má vyššie rozlíšenie	Stránka SDS má lepšie rozlíšenie.
denaturácia
Gélová elektroforéza zahŕňa techniky denaturácie aj nedenaturácie.	SDS strana denaturuje proteíny pred separáciou.

Zhrnutie - gélová elektroforéza vs SDS

Gélová elektroforéza je bežná technika používaná na separáciu a analýzu DNA, RNA a proteínov na základe ich veľkosti a náboja. Existujú dva hlavné typy gélovej elektroforézy, a to elektroforéza na agarózovom géli a elektroforéza na polyakrylamidovom géli. Agarózové gély sa používajú hlavne na separáciu nukleových kyselín; ak sa vyžaduje vyššie rozlíšenie, použijú sa polyakrylamidové gély. SDS Page je typ gélovej elektroforézy, ktorá sa bežne používa na oddelenie komplexných zmesí proteínov. Považuje sa za techniku ​​separácie proteínov s vysokým rozlíšením. Toto je rozdiel medzi gélovou elektroforézou a SDS.

Referencie:
1. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig a David H. Petering. „Native SDS-PAGE: Elektroforetická separácia proteínov s vysokým rozlíšením s retenciou pôvodných vlastností vrátane iónov naviazaných kovov. www.ncbi.nlm.nih.gov. N.p., máj 2014. Web. 7. apríla 2017
2. Stellwagen, Nancy C. „Elektroforéza DNA v agarózových géloch, polyakrylamidových géloch a vo voľnom roztoku.“ Elektroforéza. Americká národná lekárska knižnica, jún 2009. Web. 07. apríl 2017

S láskavým dovolením:
1. „Gelelektrophoreseapparatur“ (CC BY-SA 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia
2. „elektroforéza na DNA agarózovom géli“ zo školy prírodných zdrojov Ann Arbor - laboratórium DNA (CC BY 2.0) prostredníctvom Commons Wikimedia