Rozdiel medzi GFP a EGFP

kľúčový rozdiel medzi GFP a EGFP je to GFP je proteín divého typu začlenený do molekulárneho klonovania buniek cicavcov, zatiaľ čo EGFP je vylepšený alebo skonštruovaný typ GFP, ktorý sa môže použiť na bunky cicavcov..

Molekulárne klonovanie je pokročilá technika, ktorú vedci používajú pri expresii proteínov pomocou rekombinantnej technológie. V technológii rekombinantnej DNA je potrebné transformovať rekombinantný vektor úspešne na hostiteľský organizmus. Preto by sa mal počas transformačného procesu identifikovať a potvrdiť, či sa požadovaný gén transformoval na hostiteľa alebo nie. Molekulárni biológovia používajú na hodnotenie tohto stavu niekoľko techník. Z týchto techník je reportérový gén. Tieto reportérové ​​gény pôsobia ako selekčné markery na výber správnych transformantov. Zelený fluorescenčný proteín (GFP) a zvýšený zelený fluorescenčný proteín (EGFP) sú teda dva reportérové ​​proteíny používané pri molekulárnom klonovaní..

OBSAH

1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je GFP
3. Čo je EGFP
4. Podobnosti medzi GFP a EGFP
5. Porovnanie vedľa seba - GFP verzus EGFP v tabuľkovej forme
6. Zhrnutie

Čo je GFP?

GFP je proteín divého typu, ktorý obsahuje 238 aminokyselinových zvyškov a niekoľko voliteľných oblastí aminokyselinových sekvencií, ktoré ho odlišujú od ostatných fluorescenčných proteínov. Ďalej bol tento proteín divého typu pôvodne izolovaný od Aequorea Victoria; druh medúzy. Avšak v prírodných javoch bola medúza schopná vyvolať fluorescenciu zelenej farby v reakcii na určité podnety.

Skôr tento koncept vedcov prekvapil a rozhodli sa ho použiť na svoje technológie rekombinantnej DNA. Preto vedci použili túto mutantnú formu génu divého typu ako reportérový gén v štúdiách génovej expresie. Gén divého typu GFP je schopný produkovať proteín, ktorý poskytuje fluorescenciu pri izbovej teplote alebo pod UV svetlom. Preto po vložení do transformantov exprimuje a vytvára fluorescenciu. Ak fluorescencia nastane po transformačnom procese, potvrdí to úspech transformačného procesu. Jednoducho povedané, fluorescenčná emisia signalizuje úspešnú transformáciu vektora, ktorý prenáša požadovaný gén do hostiteľa.

Obrázok 01: GFP

Z tohto dôvodu sa GFP chová ako in vivo marker génovej expresie. V súčasnosti sa na výrobu GFP používajú techniky genetického inžinierstva. K dispozícii je tiež veľa vylepšených verzií GFP, ako je EGFP. To teda umožňuje efektívne využitie GFP v štúdiách molekulárneho klonovania a génovej expresie.

Čo je EGFP?

Vylepšená zelená fluorescenčná bielkovina alebo EGFP je vylepšená verzia GFP. Jednoducho povedané, môžeme definovať EGFP ako inžiniersku verziu štandardného GFP. Keď gén divého typu GFP mutuje, má priaznivé účinky. Mutovaný gén GFP teda umožňuje expresiu nových znakov, a preto môžeme produkovať vylepšený GFP so zlepšenými charakteristikami. Ďalej môžeme do génu GFP divokého typu úspešne zaviesť mutácie pomocou ožarovania alebo chemickými metódami. Tieto mutované gény potom produkujú EGFP, ktorý má priaznivejšie vlastnosti.

Obrázok 02: EGFP

Vylepšené charakteristiky EGFP sú nasledujúce;

• Je schopný vysielať silnejšie fluorescenčné signály.
• Má vysokú citlivosť.
• Môže ho používať na cicavčích bunkách namiesto prokaryotov a iných eukaryotov nižšej úrovne.
• Poskytuje tiež zvýšenú čistotu produktu.

Preto je EGFP v porovnaní s GFP preferovanou voľbou pre štúdie génovej expresie. V porovnaní s GFP je však produkt drahší.

Aké sú podobnosti medzi GFP a EGFP?

• GFP a EGFP sú dva proteíny, ktoré majú schopnosť emitovať zelenú farbu
• Preto v štúdiách génovej expresie fungujú ako reportérové ​​proteíny.
• Tiež je možné syntetizovať obidva použitím technológie rekombinantnej DNA.
• Okrem toho je ľahké ďalej mutovať tieto dva typy na syntézu zlepšených foriem.

Aký je rozdiel medzi GFP a EGFP?

Reportérový gén je gén, ktorý sa viaže s génom, ktorý je predmetom záujmu, v technológii rekombinantnej DNA. Signalizuje úspešnú transformáciu rekombinantného vektora na hostiteľa. GFP a EGFP sú tu dva typy zelených fluorescenčných proteínov, ktoré fungujú ako reportérové ​​proteíny. Kľúčový rozdiel medzi GFP a EGFP je však v tom, že GFP je divého typu, zatiaľ čo EGFP je vytvorená verzia GFP. Okrem toho má EGFP priaznivejšie vlastnosti ako GFP. Napríklad EGFP produkuje silnejšie žiarenie a je citlivejšie ako GFP. Ďalším rozdielom medzi GFP a EGFP sú systémy, v ktorých ich môžeme použiť. Cicavčie systémy používajú GFP, zatiaľ čo cicavčie systémy používajú EGFP.

Nižšie uvedený infographic predstavuje rozdiel medzi GFP a EGFP v tabuľkovej forme.

Zhrnutie - GFP vs EGFP

GFP a EGFP sú reportérové ​​proteíny v štúdiách molekulárneho klonovania a génovej expresie. GFP je proteín divého typu, ktorý je zeleným fluorescenčným proteínom. Proteín bol spočiatku izolovaný od medúzy Aequorea victoria. Naopak EFGP je zosilnená forma GFP proteínu. Je to mutant divého typu so zlepšenými vlastnosťami. EFGP má teda vyššiu silu signálu a vyššiu citlivosť. Preto ich môžeme použiť na cicavčie vektory. Na rozdiel od toho sa GFP používa hlavne iba na cicavčích vektoroch. Celkovo je to rozdiel medzi GFP a EGFP.

referencie:

1. Cinelli, RA, a kol. „Vylepšený zelený fluorescenčný proteín ako nástroj na analýzu dynamiky a lokalizácie proteínov: štúdia lokálnej fluorescencie na úrovni jednotlivých molekúl.“ Photochemistry and Phobobiology., U.S. National Library of Medicine, June 2000. K dispozícii tu  
2. „PDB101: Molekula mesiaca: Zelený fluorescenčný proteín (GFP).“ RCSB: PDB-101. K dispozícii tu

S láskavým dovolením:

1. „GFP fluorescenčný proteínový film“ Erin Rod - vlastná práca, (CC BY-SA 4.0) prostredníctvom Commons Wikimedia 
2. „CA2 amigo2 eGFP myš“ Autor: Dudek, Serena; Curuana, Douglas; Carstens, Kelly - Vlastná práca, (CC BY-SA 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia