Rozdiel medzi hybridizáciou in situ a imunohistochémiou

Kľúčový rozdiel - hybridizácia in situ vs. imunohistochémia
 

Diagnostika rakoviny a infekčných chorôb je populárnym trendom, v ktorom sa používajú nové techniky založené na proteomike a genomike na účely identifikácie nádorov alebo infekčných buniek, jej proliferácie a miest rozvoja buniek a analýzy genetického základu väčšiny prenosných a neprenosných chorôb. Výsledkom bude presné spracovanie a navrhovanie liečiv a vývoj prispôsobených terapií chorôb. In situ hybridizácia (ISH) a imunohistochémia (IHC) sú dve tak často používané techniky v biológii rakoviny a kľúčový rozdiel medzi hybridizáciou in situ a imunochemickou metódou spočíva v molekulách, ktoré sa používajú v analytickom postupe.. V ISH sa sondy nukleových kyselín používajú pri analýze, zatiaľ čo v IHC sa na diagnostické stanovenia používajú monoklonálne a polyklonálne protilátky..

OBSAH

1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je hybridizácia in situ
3. Čo je imunohistochémia
4. Podobnosti medzi hybridizáciou in situ a imunohistochémiou
5. Porovnanie vedľa seba - hybridizácia in situ vs imunohistochémia v tabuľkovej forme
6. Zhrnutie

Čo je hybridizácia in situ (ISH)?

In situ hybridizácia je technika hybridizácie nukleových kyselín, ktorá sa priamo vykonáva na časti alebo časti tkaniva, v celom tkanive alebo v bunkách. Táto technika závisí od teórie Watson Crickových komplementárnych párov báz, výsledkom čoho sú buď hybridy DNA-DNA alebo hybridy DNA-RNA, ktoré môžu detegovať mutované gény alebo identifikovať požadovaný gén, o ktorý je záujem. Jednovláknové DNA sekvencie, dvojvláknové DNA sekvencie, jednovláknové RNA sekvencie alebo syntetické oligonukleotidové sekvencie sa používajú ako sondy počas hybridizačnej techniky a tieto sondy sú na svojom 5 'konci označené rádioaktívnym fosforom pre identifikačné postupy autorádiografiou alebo značené pomocou fluorescenčných farbív. , Existujú rôzne typy techník ISH na základe typu použitej sondy a použitého typu vizualizačnej techniky.

Obrázok 01: Fluorescenčná hybridizácia in situ

Existuje mnoho aplikácií ISH, hlavne v molekulárnej diagnostike infekčných chorôb s cieľom identifikovať prítomnosť patogénov a potvrdiť patogén pomocou molekulárnej diagnostiky. Používa sa aj v oblasti vývojovej biológie, karyotypizácie a fylogenetickej analýzy a fyzikálneho mapovania chromozómov..

Čo je imunohistochémia (IHC)?

V technike IHC je hlavnou analyzovanou molekulou antigén. Počas IHC sa používajú monoklonálne a polyklonálne protilátky na stanovenie prítomnosti antigénov po infekcii alebo stave malígnej proliferácie buniek. Táto technika je založená na väzbe antigén-protilátka a pre túto techniku ​​sa používajú enzýmové značky; jednou takouto aplikáciou je ELISA (Enzyme linked imunosorbent assay). Markermi môžu byť tiež fluorescenčné značené protilátky alebo rádioaktívne značené protilátky.

Obrázok 02: Imunohistochémia

IHC sa široko používa na detekciu rakovinových buniek. Diagnostické postupy sa zameriavajú na antigény prítomné v nádorových bunkách na identifikáciu a charakterizáciu nádoru. Rovnaký postup sa používa na diagnostikovanie infekčných pôvodcov. Monoklonálne a polyklonálne protilátky sa tiež používajú na analýzu rôznych génových produktov umožnením reakcie väzby protilátky a antigénu medzi požadovaným proteínom a syntetickou protilátkou..

Aké sú podobnosti medzi hybridizáciou in situ a imunohistochémiou?

• ISH a IHC sú vysoko špecifické reakcie.
• Obe techniky sú vysoko presné.
• Obe techniky sa môžu použiť v diagnostike rakoviny a infekčných chorôb.
• Tieto techniky sa uskutočňujú v sterilnom prostredí in vitro.
• Obidve sú rýchle techniky, ktoré poskytujú reprodukovateľné výsledky.
• ISH a IHC používajú detekčné metódy, ako je rádioaktívne značenie a fluorescenčné techniky.

Aký je rozdiel medzi hybridizáciou in situ a imunohistochémiou?

In situ hybridizácia vs imunohistochémia
ISH je technika hybridizácie nukleových kyselín, ktorá sa priamo vykonáva na časti alebo časti tkaniva alebo na celom tkanive.	IHC je technika, pri ktorej sa na stanovenie prítomnosti antigénov, ktoré sú špeciálnymi proteínovými markermi umiestnenými na bunkových povrchoch, používajú monoklonálne a polyklonálne protilátky..
Typ analyzovaných biologických molekúl
ISH analyzuje nukleové kyseliny.	IHC analyzuje proteíny-antigény.
Základy biochemickej reakcie
Pri tejto technike dochádza k doplnkovému párovaniu báz medzi DNA-DNA alebo DNA-RNA.	Interakcie antigén-protilátka sa podieľajú na imunohistochémii.
Metódy detekcie spojené s enzýmami
Metódy detekcie spojené s enzýmami sa nemôžu použiť v ISH.	V IHC sa môžu použiť metódy detekcie spojené s enzýmami.

Zhrnutie - hybridizácia in situ vs imunohistochémia

Molekulárna diagnostika je rýchla a potvrdzujúca metóda, ktorá sa môže použiť na identifikáciu neprenosného ochorenia, ako je rakovina alebo prenosné ochorenie, ako je HIV alebo tuberkulóza, na základe molekulárnych markerov prítomných na bunkách, ktoré vedú k prejavu choroby. Molekulové markery môžu byť prítomné vo forme exprimovaných proteínov alebo na genetickej úrovni, na základe ktorých sú zavedené rôzne nové techniky na zvýšenie účinnosti a sú menej pracné, aj keď s týmito technikami sú spojené vysoké náklady. ISH teda závisí od tvorby hybridnej DNA-DNA alebo DNA-RNA a IHC závisí od špecifických reakcií medzi protilátkou a antigénom. Toto je rozdiel medzi hybridizáciou in situ.

Stiahnite si verziu PDF hybridizácie v situáciách s imunohistochémiou vo formáte PDF

Môžete si stiahnuť verziu tohto článku vo formáte PDF a použiť ju na účely offline podľa citácie. Stiahnite si verziu PDF tu Rozdiel medzi hybridizáciou in situ a imunohistochémiou.

Referencie:

1. Duraiyan, Jeyapradha a kol. „Aplikácie imunohistochémie“. Vestník farmaceutických a biologických vied, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, august 2012, k dispozícii tu. Prístup k 24. augustu 2017.
2. „Hybridizácia in situ (ISH).“ Národné centrum pre biotechnologické informácie, Národná lekárska knižnica USA, k dispozícii tu. Prístup k 24. augustu 2017.

S láskavým dovolením:

1. „FISH (Fluorescenčná in situ hybridizácia)“ MrMatze - vlastná práca (CC BY-SA 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia
2. „Immunohistochemické farbenie2“ Imoenom na Wikipédii v anglickom jazyku (CC BY-SA 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia