Rozdiel medzi fúziou a polymerázou Taq

Kľúčový rozdiel - Phusion vs Taq polymerázová
 

DNA polymerázy sú široko používané enzýmy v technikách molekulárnej biológie a sú tiež prirodzene prítomné vo všetkých organizmoch, ktoré podliehajú replikácii DNA. Sú to kľúčové polymerizačné enzýmy, ktoré sa vyskytujú počas replikácie. DNA polymeráza je schopná pridávať nukleotidy k voľnému 3 'koncu reťazca DNA, čím spôsobuje predĺženie nového vlákna. V súčasnosti je vzhľadom na vývoj molekulárnej biológie v diagnostike chorôb a priemyselných aplikáciách dôležité vyrábať polymerázy, ktoré majú rôzne užitočné vlastnosti. To zvyšuje presnosť metódy a robí ju rýchlejšou technikou. Phusion a Taq polymeráza sú dva komerčne vyrábané termostabilné polymerázové enzýmy, ktoré sa používajú v špeciálnych molekulárnych aplikáciách. Fúzia je DNA polymeráza izolovaná z Pyrococcus furiosus a používa sa hlavne pri pokusoch o klonovanie na zvýšenie vernosti. Taq DNA polymeráza je štandardná DNA polymeráza použitá v polymerázovej reťazovej reakcii (PCR) a je izolovaná z termostabilnej baktérie; Thermus aquaticus. kľúčový rozdiel medzi týmito dvoma enzýmami je zdrojový mikroorganizmus. Fúzia je izolovaná od extrémofilu, Pyrococcus furiosus zatiaľ čo Taq polymeráza je izolovaná z termofilu, Thermus aquaticus.

OBSAH

1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je Phusion
3. Čo je Taq Polymerase
4. Podobnosti medzi fúziou a polymerázou Taq
5. Porovnanie vedľa seba - Phusion vs Taq Polymerase v tabuľkovej forme
6. Zhrnutie

Čo je Phusion?

Fúzna DNA polymeráza je nová polymeráza, ktorá sa vyrába izoláciou enzýmu z Pyrococcus furiosus, čo je extrémofilný Archaea. Tieto mikróby sa nachádzajú v extrémne vysokých teplotách, čím sa z polymerázy stáva vysoko tepelne stabilná polymeráza. Fúzna polymeráza sa používa na získanie extrémnej vernosti oproti konvenčnej termostabilnej polymeráze; Taq polymeráza. Fúzna polymeráza je schopná amplifikovať dlhé templáty až do 7,5 kb genomickej DNA. Optimálna polymerizačná kapacita Phusion polymerázy je 72⁰ C. Fúzia sa tiež používa v klonovacích produktoch na sekvenovanie, analýzu expresie a analýzu mutácií.

Fúzna DNA polymeráza má 3 '- 5' exonukleázovú aktivitu. To umožňuje korektúru novo syntetizovaného vlákna po syntéze. Nukleotidové nezhody sa teda dajú ľahko opraviť. Má teda menšiu chybovosť. Celkové výhody Phusion polymerázy sú;

• Extrémna vernosť
• Vysoká rýchlosť a skrátený čas predĺženia
• Robustné reakcie a vyžaduje minimálnu optimalizáciu
• Vysoký výnos

Obrázok 01: Fúzia

Hlavnou nevýhodou fúznej polymerázy je to, že je inhibovaná v prítomnosti deoxyuridíntrifosfátu (dUTP). Ak sa dUTP akumulujú v reakčnej zmesi, môže to inhibovať pôsobenie Phusion polymerázy. Tomu je zabránené reakciou reakčnej zmesi s dUTPázou pred pridaním enzýmu. V súčasnosti sa namiesto nápravy tohto problému používa namiesto Phusion polymerázy rezistentný variant dUTP rezistentnej Phusion polymerázy známy ako Pfu Turbo..

Čo je Taq polymeráza?

Taq DNA polymeráza vynález revolúciu v oblasti molekulárnej biológie. Vyriešil hlavný problém v amplifikácii DNA. Taq DNA polymeráza je tepelne stabilný polymerázový enzým extrahovaný a izolovaný z termofilnej baktérie, Thermus aquaticus. Objav týchto enzýmov vedie k vývoju PCR. Tento enzým umožnil použitie polymerázovej reťazovej reakcie pri amplifikácii DNA namiesto bežných prácnych klonovacích techník. PCR sa teraz používa v molekulárnej diagnostike, poľnohospodárstve a priemysle s mnohými novými variáciami, ktoré sa pridávajú k technike.

Obrázok 02: Taq polymeráza

Taq DNA polymeráza funguje v optimálnom teplotnom rozmedzí medzi 72⁰C - 80⁰C. Taq DNA polymeráza vyžaduje kofaktor; horčík pre svoju funkciu. Taq polymeráza nemá korekčnú schopnosť 3 '- 5', preto je miera chybovosti Taq DNA polymerázy vysoká v porovnaní s novšími typmi DNA polymeráz, ako je Phusion polymeráza atď. Popularita Taq DNA polymerázy však zostáva rovnaké vo svete vedy kvôli pohodliu a flexibilite enzýmu.

Aké sú podobnosti medzi fúziou a polymerázou Taq?

• Enzýmy Phusion aj Taq polymeráza sú polymerizujúce enzýmy, ktoré sú schopné pridávať nukleotidy k 3 'voľnému koncu reťazca DNA..
• Polymerázy Phusion aj Taq vyžadujú na začatie polymerizácie sekvenciu primérov.
• Polymerázy Phusion aj Taq sú tepelne stabilné.
• Polymerázy Phusion aj Taq sa používajú v mechanizmoch PCR na amplifikáciu DNA.
• Keď sa pridáva polymeráza do reakčnej zmesi, pridávajú sa ako posledné Phusion aj Taq polymerázy, aby sa zabezpečila účinnosť enzýmu.
• Polymerázy Phusion aj Taq sú komerčne syntetizované na experimentálne účely molekulárnej biológie.
• Polymerázy Phusion aj Taq vyžadujú na dokončenie svojej funkcie kofaktor.

Aký je rozdiel medzi fúziou a polymerázou Taq?

Phusion vs Taq Polymerase
Fúzia je DNA polymeráza izolovaná z Pyrococcus furiosus a používa sa hlavne pri pokusoch o klonovanie na zvýšenie vernosti.	Taq DNA polymeráza je štandardná DNA polymeráza použitá v polymerázovej reťazovej reakcii (PCR) a je izolovaná z termostabilnej baktérie, Thermus aquaticus.
Zdrojový organizmus
Fúzia sa extrahuje z extrémofilného archaea - Pyrococcus furiosus.	Tieto literárne diela siahajú od obdobia kolonizácie po obdobie dekolonizácie.
Schopnosť korektúry
Vo Phusion je k dispozícii schopnosť čítania 3 '- 5' korektúr.	V Taq polymeráze chýba schopnosť čítania 3 '- 5'.
vernosť
S Phusion je vysoká vernosť.	Polymeráza Taq vykazuje nízku vernosť.
rozšírenie
Fúzia je schopná amplifikovať dlhé fragmenty DNA.	Taq polymeráza je schopná amplifikovať oveľa kratšie fragmenty DNA.
Otrava dUTP
Fúzne pôsobenie je inhibované akumuláciou nepárne.	Taq polymeráza nie je inhibovaná dUPT.

zhrnutie - Phusion vs Taq polymeráza

Phusion a Taq DNA polymeráza sú dve tepelne stabilné polymerázy, ktoré sa používajú v technikách PCR. Fúzia je polymeráza izolovaná z extrémofilu, Pyrococcus furiosus zatiaľ čo Taq je izolovaný z termostabilných baktérií Thermus aquaticus. Objav Taq DNA polymerázy vedie k vynálezu PCR. Phusion má oproti Taq mnoho výhod, vďaka ktorým je Phusion lepšou možnosťou pri produkcii DNA s vysokou vernosťou. Polymeráza Taq sa však v PCR stále používa ako štandardný enzým polymerázy. Toto je rozdiel medzi Phusion a Taq polymerázou.

referencie:

1.Biolabs, New England. „Taq DNA polymerázy.“ Biológy v Novom Anglicku: Reagencie pre priemysel prírodných vied. K dispozícii tu  
2. „Fúzna DNA polymeráza.“ New England Biolabs. K dispozícii tu 

S láskavým dovolením:

1.'GAM ilustruje Nivin Nasri'By NivinN - vlastné dielo (CC BY-SA 4.0) prostredníctvom Commons Wikimedia  
2.'Taq'By Adenosine - vlastné dielo (CC BY-SA 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia