Rozdiel medzi reverznou fázou a HPLC s normálnou fázou

kľúčový rozdiel medzi HPLC s reverznou fázou a HPLC s normálnou fázou je HPLC s reverznou fázou používa polárnu stacionárnu fázu a menej polárnu mobilnú fázu, zatiaľ čo HPLC s normálnou fázou používa nepolárnu stacionárnu fázu a polárnu mobilnú fázu.

HPLC s normálnou fázou je najstaršou technikou HPLC, ktorú Tswett použil pri svojich separáciách rastlinných extraktov; kriedu použil v sklenenom stĺpci. Bol to klasický spôsob chromatografie, ktorý ho nazval „normálnou“ technikou. Na druhej strane HPLC s reverznou fázou je opakom normálnej techniky, ktorú vedci vyvinuli v poslednej dobe.

OBSAH

1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je HPLC na reverznej fáze
3. Čo je to HPLC s normálnou fázou
4. Porovnanie vedľa seba - HPLC s reverznou fázou vs. HPLC s normálnou fázou v tabuľkovej forme
5. Zhrnutie

Čo je HPLC na reverznej fáze?

HPLC s reverznou fázou je chromatografická technika, pri ktorej používame hydrofóbnu stacionárnu fázu. Vo všetkých metódach HPLC používame túto metódu približne na 70% kvôli jej širokej uplatniteľnosti a reprodukovateľnosti. Stacionárna fáza je nepolárna a mobilná fáza je polárna.

Vedci väčšinou používajú vodnú zmes vody s miešateľným polárnym organickým rozpúšťadlom, ako je acetonitril alebo metanol, ako mobilnú fázu. Analyty preto interagujú s nepolárnou stacionárnou fázou.

Čo je to HPLC s normálnou fázou?

HPLC s normálnou fázou je chromatografická technika, pri ktorej používame hydrofilnú stacionárnu fázu. Je to tradičná metóda HPLC, hoci ju príliš nepoužívame. Stacionárna fáza je polárna a mobilná fáza je nepolárna. A čo je dôležitejšie, mobilná fáza tejto techniky je 100% organická. To znamená, že na to nie je použitá žiadna voda.

Obrázok 01: Profil vzorky pre HPLC chromatogramy s normálnou a reverznou fázou podľa polarity zložiek v analyzáte.

Stacionárna fáza obvykle obsahuje oxid kremičitý, kyano, diol, amino-viazané fázy, atď. Mobilné fázy zahŕňajú organické rozpúšťadlá, ako je hexán, etylacetát, atď. Táto technika sa zakladá na zadržaní molekúl rozpúšťadla alebo analytu na polárnej stacionárnej fáze..

Aký je rozdiel medzi HPLC s reverznou fázou a normálnou fázou HPLC?

HPLC s reverznou fázou je chromatografická technika, pri ktorej používame hydrofóbnu stacionárnu fázu. Stacionárna fáza tejto techniky je nepolárna. Stacionárna fáza je nepolárna, zatiaľ čo mobilná fáza je polárna. Vedci okrem toho používajú ako mobilnú fázu v HPLC s reverznou fázou vodnú zmes vody s miešateľným polárnym organickým rozpúšťadlom, ako je acetonitril alebo metanol. Zatiaľ čo HPLC s normálnou fázou je chromatografická technika, pri ktorej používame hydrofilnú stacionárnu fázu. Stacionárna fáza tejto techniky je polárna. Stacionárna fáza je polárna, zatiaľ čo mobilná fáza je nepolárna. Vedci okrem toho používajú ako mobilnú fázu HPLC s normálnou fázou organické rozpúšťadlá, ako je hexán, etylacetát atď. Nižšie uvedený infographic predstavuje rozdiel medzi HPLC s reverznou fázou a HPLC s normálnou fázou v tabuľkovej forme.

Zhrnutie - reverzná fáza vs. HPLC s normálnou fázou

Techniky HPLC s reverznou fázou a normálnou fázou sú dve techniky kvapalinovej chromatografie. Rozdiel medzi HPLC s reverznou fázou a normálnou fázou je ten, že HPLC s reverznou fázou používa polárnu stacionárnu fázu a menej polárnu mobilnú fázu, zatiaľ čo HPLC s normálnou fázou používa nepolárnu stacionárnu fázu a polárnu mobilnú fázu.

referencie:

1. Vody. „HPLC separačné režimy.“ HPLC - vysokoúčinná kvapalinová chromatografia vysvetlená: Waters. K dispozícii tu