Rozdiel medzi RP HPLC a HIC

kľúčový rozdiel medzi RP HPLC a HIC je to RP HPLC používa polárnejšiu mobilnú fázu a menej polárnu stacionárnu fázu. Zatiaľ čo HIC používa hydrofóbnu stacionárnu fázu, ktorá umožňuje hydrofóbnym molekulám sa k nemu pripojiť.

Chromatografia je analytická technika, ktorá pomáha rozdeliť zmes na jej zložky. Najprv musíme rozpustiť vzorku, ktorá sa má rozdeliť, do roztoku. Táto zmes roztoku a látky sa nazýva mobilná fáza. Potom mobilná fáza prechádza ďalším materiálom nazývaným stacionárna fáza. Stacionárna fáza určuje oddelenie komponentov. K separácii dochádza v dôsledku delenia materiálu medzi mobilnú fázu a stacionárnu fázu.

OBSAH

1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je RP HPLC
3. Čo je HIC
4. Porovnanie bok po boku - RP HPLC vs. HIC v tabuľkovej forme
5. Zhrnutie

Čo je RP HPLC?

Výraz RP HPLC znamená Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia s reverznou fázou. Zahŕňa separáciu zložiek v zmesi podľa hydrofóbnosti. Hydrofóbne zložky v mobilnej fáze sa spájajú s imobilizovanými hydrofóbnymi ligandami v stacionárnej fáze, zatiaľ čo hydrofilné zložky sa eluujú stacionárnou fázou bez toho, aby sa pripojili na povrch stacionárnej fázy..

Obrázok 01: HPLC prístroje

Táto metóda má navyše väčšiu reprodukovateľnosť v porovnaní s inými chromatografickými technikami a vykazuje tiež širokú použiteľnosť. Preto túto metódu používame v laboratóriách pre viac ako 75% všetkých metód HPLC. Ako mobilnú fázu sa väčšinou používa vodná zmes vody s miešateľným polárnym organickým rozpúšťadlom. Takto bude zaistené pripojenie hydrofóbnych zložiek v roztoku na povrch stacionárnej fázy.

Čo je HIC?

Výraz HIC znamená Hydrofóbna interakčná chromatografia. Je to typ reverznej fázy HPLC a táto metóda sa používa hlavne na separáciu veľkých biomolekúl, ako sú proteíny. Pri tejto metóde musíme na vytvorenie vzorky biomolekuly použiť vodné médium. Je to preto, že organické rozpúšťadlá môžu spôsobiť denaturáciu proteínov. Okrem toho táto technika využíva interakciu medzi veľkými molekulami s mierne hydrofóbnym povrchom stacionárnej fázy. Ďalej musíme vo vzorke použiť vysokú koncentráciu soli, pretože to povzbudzuje, aby sa proteín zachoval na balení; tento proces sa nazýva solenie. Postupným znižovaním koncentrácie solí môžeme biomolekuly eluovať oddelene podľa ich hydrofóbnosti.

Táto metóda obvykle používa podmienky opačné ako podmienky ionomeničovej chromatografie. V tejto technike musíme najprv prejsť tlmivým roztokom cez kolónu, aby sme znížili solvatáciu rozpustenej látky vo vzorke. Vystavuje hydrofóbne oblasti proteínu. Ak je však molekula hydrofóbnejšia, vyžaduje sa na zvýšenie väzby menej soli. Tu sa najskôr eluujú menej hydrofóbne rozpustené látky a podľa zmeny koncentrácie soli sa eluujú viac hydrofóbne rozpustené látky ako posledné..

Aký je rozdiel medzi RP HPLC a HIC?

Chromatografia je analytická technika na separáciu zložiek v zmesi. RP HPLC a HIC sú dve špecializované chromatografické techniky. Kľúčový rozdiel medzi RP HPLC a HIC je v tom, že RP HPLC používa polárnejšiu mobilnú fázu a menej polárnu stacionárnu fázu, zatiaľ čo HIC používa hydrofóbnu stacionárnu fázu, ktorá umožňuje, aby sa na ňu naviazali hydrofóbne molekuly..

Nižšie uvedený infographic sumarizuje rozdiel medzi RP HPLC a HIC.

Zhrnutie - RP HPLC vs. HIC

referencie:

1. „Separačné režimy HPLC.“ Vody, k dispozícii tu.

S láskavým dovolením:

1. „Prípravná HPLC“ od GYassineMrabetTalk & # x2709; Tento vektorový obrázok nešpecifikovaný W3C bol vytvorený pomocou Inkscape. - Vlastná práca (CC BY 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia

Veda a príroda