Rozdiel medzi stránkou SDS a pôvodnou stránkou

Kľúčový rozdiel - stránka SDS oproti domorodcovi strana
 

SDS a natívna stránka sú dva typy techník elektroforézy na polyakrylamidovom géli, ktoré sa používajú v Molecular Biology. kľúčový rozdiel medzi SDS Page a Native Page je typ použitého polyakrylamidového gélu. Na SDS Page sa preto používa denaturačný gél, molekuly sa separujú na základe ich molekulovej hmotnosti. Naproti tomu v Native Page sa používajú nedenaturujúce gély. Preto sú molekuly separované na základe ich veľkosti, náboja a tvaru.

Elektroforéza na polyakrylamidovom géli (Strana) používa gél vyrobený polymerizáciou akrylamidových monomérov s metylén-bisakrylamidom. Polyakrylamid je tvrdší a tepelne stabilnejší ako agaróza. Polyakrylamidové gély majú menšiu veľkosť pórov, čo umožňuje účinnú separáciu proteínov. Existujú dva hlavné typy nastavení stránky, konkrétne SDS a Native Page. Stránka SDS alebo Elektroforéza na polyakrylamidovom géli sódium-dodecylsulfátom oddeľuje proteíny na základe ich molekulových hmotností. Denaturačné gély sa používajú na stránke SDS Page. Native Page používa nedenaturujúce gély a oddeľuje proteíny na základe ich veľkosti, náboja a tvaru (3D konformácia).

OBSAH

1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je to strana SDS
3. Čo je domorodá stránka
4. Podobnosti medzi stránkou SDS a pôvodnou stránkou
5. Porovnanie bok po boku - stránka SDS verzus natívna stránka v tabuľkovej forme
6. Zhrnutie

Čo je to karta SDS?

SDS Page je najbežnejšia elektroforetická technika použitá na oddelenie proteínov na základe ich molekulovej hmotnosti. Gél sa pripraví pridaním SDS (dodecylsulfát sodný), čo je detergent. SDS protézy proteínov na monoméry. SDS je aniónový detergent. Preto dodáva proteínom čistý záporný náboj v širokom rozmedzí pH. Keď je na proteínové molekuly prenesený čistý záporný náboj, v dôsledku zmeny náboja sa zložité štruktúry rozložia. V dôsledku negatívneho náboja proteíny priťahujú k pozitívnemu koncu. Molekuly s nižšou molekulovou hmotnosťou sa teda pohybujú rýchlejšie na gélovej matrici a môžu sa pozorovať blízko anódy, zatiaľ čo proteíny s vyššou molekulovou hmotnosťou sa pozorujú bližšie k jamkám..

Obrázok 01: SDS

Väzba SDS na polypeptidový reťazec je úmerná jeho relatívnej molekulovej hmotnosti. Molekulárnu hmotnosť je preto možné určiť aj pomocou. Farbenie SDS Page gélov sa uskutočňuje farbením bromofenolovou modrou. Aplikácia stránky SDS sa vo väčšej miere týka rozsahu, v ktorom sa môže použiť na odhad relatívnej molekulovej hmotnosti a na stanovenie relatívneho množstva proteínov v proteínovej zmesi. Stránka SDS môže byť tiež použitá na určenie distribúcie proteínov v zmesi proteínov. Stránka SDS Page sa používa aj na čistenie a hodnotenie proteínov. Používa sa ako predbežný postup pre westernový prenos a hybridizáciu, ktorá sa zase používa na mapovanie a identifikáciu proteínov.

Čo je domorodec?

Elektroforéza na natívnom polyakrylamidovom géli (Native Page) používa nedenaturujúci gél. Preto sa do gélovej matrice nepridáva SDS alebo akékoľvek iné denaturačné činidlo. V Native Page je separácia proteínov založená na náboji a veľkosti proteínu. Preto mobilita proteínu závisí od náboja a veľkosti proteínu.

Náboj proteínu závisí od bočných reťazcov aminokyselín. Ak sú bočné reťazce záporne nabité, proteín získa celkový záporný náboj a naopak. Proteíny si zachovávajú 3D konformáciu vďaka skladaniu, ktoré sa koná. Skladanie je výsledkom niekoľkých typov väzieb v proteínoch, ako sú disulfidové väzby, hydrofóbne interakcie a vodíkové väzby. Preto, ak sa natívna strana prenáša pri neutrálnom pH, proteíny sa budú separovať podľa molekulárneho tvaru proteínu. Native Page sa preto môže použiť ako citlivá technika na detekciu zmeny náboja alebo konformácie proteínu.

Hlavnou výhodou natívnej stránky je, že proteín použitý na analýzu strany sa môže po analýze stránky získať v pôvodnom stave, pretože proteín sa počas procesu naruší. Native Page je technika s vysokou priepustnosťou a stabilita proteínu sa zvyšuje.

Obrázok 02: Pôvodná stránka

Po dokončení cyklu gélu je možné vidieť na natívnom géle farbenie bromofenolovou modrou alebo iným vhodným farbiacim činidlom. Aplikácie Native Page zahŕňajú separáciu kyslých proteínov vrátane glykoproteínov ako je ľudský rekombinantný erytropoetín alebo identifikáciu proteínov prítomných v bovinnom sérovom albumíne (BSA)..

Aké sú podobnosti medzi stránkou SDS a natívnou stránkou?

• Systémy SDS Page a Native Page používajú polyakrylamidový gél ako matricu gélu.
• Oba sa používajú na separáciu a identifikáciu proteínov.
• Obidve tieto látky používajú elektroforetickú mobilitu.
• Obidve sa dajú vykonať vertikálnym alebo horizontálnym spôsobom (väčšinou sa môžu vykonať ako vertikálne nastavenia stránky, pretože dĺžka behu je väčšia)..
• Elektroforetický prístroj vrátane gélovej nádrže, hrebene, je potrebný napájací zdroj pre fungovanie obidvoch techník.
• Vizualizácia gélu môže byť uskutočnená farbením v oboch technikách.

Aký je rozdiel medzi stránkou SDS a natívnou stránkou?

Stránka SDS vs. domorodá stránka
Stránka SDS alebo stránka Sodium-dodecylsulfát oddeľuje proteíny na základe ich molekulovej hmotnosti a používa denaturačný gél.	Native Page používa nedenaturujúce gély a oddeľuje proteíny na základe ich veľkosti, náboja a tvaru (3D konformácia).
Typ gélu
Na SDS-stránke sa používa denaturačný gél.	Na natívnej stránke sa používa nedenaturujúci gél.
Prítomnosť KBÚ
SDS je prítomný ako detergent, ktorý dodáva vzorke na stránke SDS záporný náboj.	Karta SDS sa nenachádza na natívnej stránke.
Základ separácie
Separácia proteínov závisí od molekulovej hmotnosti proteínu na stránke SDS.	Separácia závisí od veľkosti a tvaru molekuly proteínu v natívnej stránke.
Stabilita proteínu
Stabilita proteínu je na stránke SDS nízka.	Stabilita proteínu je na pôvodnej stránke vysoká.
Obnovenie pôvodného proteínu
Nie je to možné, pretože je denaturovaný na stránke SDS.	Možné na natívnej stránke.

zhrnutie - Stránka SDS verzus Native strana

SDS Page a Native Page sú dva typy techník elektroforézy na polyakrylamidovom géli, ktoré sa používajú na separáciu proteínov. Stránka SDS je ošetrená saponátom nazývaným SDS. SDS dodáva proteínu celkovo negatívny náboj, čo vedie k denaturácii proteínu. Preto sú proteíny separované na základe ich molekulovej hmotnosti. Na rozdiel od toho, technológia Native Page nepoužíva žiadne denaturačné činidlo. Proteíny sú teda buď separované na základe ich veľkosti alebo tvaru. Toto je rozdiel medzi stránkou SDS a natívnou stránkou.

referencie:

1. „Princíp a metóda elektroforézy na polyakrylamidovom géli (SDS-PAGE).“ Princíp a metóda elektroforézy na polyakrylamidovom géli (SDS-PAGE) | MBL Life Sience -ASIA-. K dispozícii tu
2. „Natívne gély.“ Laboratóriá pre aliančné bielkoviny | Biofyzikálna charakterizácia. K dispozícii tu  

S láskavým dovolením:

1.'SDS-PAGE Elektroforéza'Byaccount na anglickej Wikipédii (CC BY 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia.  
2.Vložte vzorku do elektroforézy na polyakrylamidovom géli elektroforézou. Blaz Nemec z Ľubľany v Slovinsku (CC BY-SA 2.0) prostredníctvom Commons Wikimedia