Rozdiel medzi teplým a studeným pokusom o očkovanie

Kľúčový rozdiel - Teplý vs Chladný trypsinizací

Teplá a studená trpsinizácia sú dve metódy používané pri enzymatickej dezagregácii buniek pri kultivácii živočíšnych buniek. kľúčový rozdiel medzi teplou a studenou trypsinizáciou, ako už názov napovedá, závisí od teploty, pri ktorej sa trypsín pridáva na bunkovú dezagregáciu. Teplá trypsinizácia sa uskutočňuje pri vyšších teplotách (36,5 - 37%) ⁰C) zatiaľ čo trypsinizácia za studena prebieha za nízkoteplotných podmienok.

V priebehu procesu primárnej bunkovej kultivácie živočíšnych buniek sa používajú tri hlavné metódy, ktoré sa ukázali ako úspešné. Tieto tri metódy zahŕňajú mechanickú dezagregáciu buniek, enzymatickú dezagregáciu buniek a techniku primárneho explantátu. Enzymatická dezagregácia buniek vedie k izolácii buniek a je uskutočňovaná enzýmom degradujúcim proteín trypsín. Preto je tento proces známy ako trypsinizácia. Trypsinizácia sa môže uskutočňovať za dvoch rôznych podmienok, a to Teplá Trypsinizácia a Studená Trypsinizácia. Teplá trypsinizácia je metóda ošetrenia buniek trypsínom za teplých podmienok pri teplote 36,5 - 37 ° C. ⁰C. Trypsinizácia za studena je proces úpravy trypsínom, ktorý sa uskutočňuje v chladnejších podmienkach, výhodne v ľade, pričom sa udržiavajú veľmi nízke teploty..

OBSAH

1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je teplá trinspinizácia
3. Čo je studená trypinizácia
4. Podobnosti medzi teplým a studeným pokusom o očkovanie
5. Porovnanie bok po boku - teplá vs studená trypsinizácia v tabuľkovej forme
6. Zhrnutie

Čo je to teplá trinspinizácia?

Trypsinizácia sa môže uskutočniť na dezagregáciu bunkových komponentov, aby sa bunky izolovali, čím sa vytvorí primárna bunková kultúra. Trypsín je enzým degradácie proteínov a zmes enzýmov použitá pri trypsinizácii môže byť buď surový extrakt alebo vyčistený produkt. Hrubý extrakt je považovaný za účinnejší v proteínovej lýze a bunkovej dezintegrácii, pretože obsahuje ďalšie degradačné enzýmy.

Teplá trypsinizácia je najbežnejšie používanou enzymatickou metódou pre dezagregáciu buniek, ktorá sa uskutočňuje pri podmienkach vyššej teploty. Pred ošetrením trypsinizáciou sa požadované tkanivo naseká na menšie kúsky. Uľahčuje proces ľahkej dezagregácie. Nasekané tkanivo sa potom premyje v špeciálnom médiu známom ako médium disekčnej bazálnej soli.

Po dokončení premývacieho kroku sa bunky transformujú do banky obsahujúcej aktívny enzým, ktorým je trypsín. Pretože táto technika predpokladá teplý trypsinizačný protokol, trypsín sa umiestni pri teplote okolo 37 ° C ⁰C asi štyri hodiny.

Obrázok 01: Trypsín

Obsahy sa zmiešajú a pretrepávajú pomocou centrifugačných metód na uľahčenie protokolu a na urýchlenie procesu dezagregácie. Po dosiahnutí odporúčaného času môžu byť bunky odvodené zo supernatantu. Bunky získané zo supernatantu sa potom inkubujú pri určitej teplote a čase.

Čo je studená trypinizácia?

Trypsinizácia za studena je ďalším typom trypsinizácie, ktorá sa uskutočňuje v chladných podmienkach. Pri tejto technike sa nasekané a premyté bunky umiestnia do liekoviek na ľade a potom sa namočia trypsínom. Doba máčania je omnoho dlhšia - asi 6 - 24 hodín.

Po ukončení procesu máčania sa trypsín z bunkového lyzátu odstráni a kúsky tkaniva sa ďalej inkubujú pri 37 ° C.⁰C asi 20 - 30 minút. Dezagregácia buniek je spôsobená opakovaným pipetovaním tkanivovej zmesi. To umožní bunkám disociovať sa z membrány a dospieť k supernatantu. Keď sú bunky v supernatante, sú inkubované a pestované pri požadovanej teplote a časovom období.

Metóda studenej trypsinizácie má niekoľko výhod

Vyšší výťažok životaschopných buniek pri minimalizácii poškodenia buniek. Poškodenie buniek sa minimalizuje nepoužitím krokov odstreďovania.
Veľmi pohodlná metóda.
Menej pracné.

Hlavným obmedzením metódy trypsinizácie za studena je, že veľké množstvá sa nemôžu použiť v jednom prípade.

Aké sú podobnosti medzi teplým a studeným pokusom o očkovanie?

Procesy teplého aj studeného trypsínu využívajú enzým trypsín na dezagregáciu buniek.
V postupoch bunkovej kultúry sa na dezagregáciu buniek používajú procesy teplého aj studeného trypsinizácie.
Pri postupoch zahrievania teplým aj studeným trypsinizáciou sú bunky odvodené zo supernatantu.

Aký je rozdiel medzi teplou a studenou trypsinizáciou?

Trypsinizácia teplým vs studeným
Teplá trypsinizácia je metóda ošetrenia buniek trypsínom za teplých podmienok pri teplote 36,5 - 37 ° C. ⁰.	Trypsinizácia za studena je proces úpravy trypsínom, ktorý sa uskutočňuje v chladnejších podmienkach, prednostne v ľade pri udržiavaní veľmi nízkych teplôt..
Protokol
Nasekané kúsky tkaniva sa udržiavajú pri 37 ° C ⁰C nepretržite počas celého postupu.	Nasekané kúsky tkaniva sa spočiatku udržiavajú pri ľadových teplotách a potom sa udržiavajú pri 37 ° C ⁰.
teplota
Teplá trypsinizácia nastáva pri 36,5 - 37 ⁰	K studenej trypsinizácii dochádza pri nízkych teplotách ľadu.
Čas spotrebovaný
Menší čas potrebný na celý proces (približne 4 hodiny) teplej trypsinizácie.	Potrebná dlhšia doba (približne 6 - 24 hodín) na trypsinizáciu za studena.
Výťažok životaschopných buniek
Nízka teplá trypsinizácia.	Vysoko v studenej trypsinizácii.
Použitie odstredenia
Centrifugácia je potrebná na dezagregáciu buniek pri teplej trypsinizácii.	Pri studenej trypsinizácii nie je potrebné odstredenie.
Počiatočné množstvo tkaniva pre trypsinizáciu
Pri teplej trypsinizácii sa môže použiť väčšie množstvo tkaniva.	Pri studenej trypsinizácii sa môže použiť menšie množstvo tkaniva.
Poškodenie buniek
Vysoká vďaka odstredeniu pri teplej trypsinizácii.	Menej kvôli studenej trypsinizácii.

zhrnutie - Teplý vs Chladný trypsinizací

Trypsinizácia je spôsob použitia enzýmu trypsínu degradujúceho proteín na dezagregáciu a prípravu primárnych bunkových kultúr počas procesu bunkovej kultivácie. Existujú dve hlavné techniky trypsinizácie založené na teplotách použitých počas postupu. Sú to teplá a studená trypsinizácia. Teplá trypsinizácia sa uskutočňuje pri 37 ° C ⁰C, zatiaľ čo trypsinizácia za studena sa uskutočňuje v ľadovo chladných podmienkach. Aj keď studená trypsinizácia vyžaduje na dokončenie dlhší čas, uvádza sa, že má vyšší výťažok životaschopných buniek. Dôvodom je skutočnosť, že pri studenej trypsinizácii je poškodenie buniek minimalizované, pretože nepoužíva intenzívne kroky odstreďovania. Toto je rozdiel medzi teplou a studenou trypsinizáciou.

referencie:

1. "trypsinizací." Trypsinizácia - prehľad Témy ScienceDirect. K dispozícii tu
2. „Primárna bunková kultúra: 3 techniky (s diagramom).“ Diskusia o biológii, 16. októbra 2015. K dispozícii tu

S láskavým dovolením:

1.'Vyskúšajte si aktívny web'By Fdardel - vlastná práca, (CC BY-SA 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia

Veda a príroda