Rozdiel medzi fágovým vektorom YAC a M13

Kľúčový rozdiel - fágový vektor YAC verzus M13
 

Klonovanie DNA je dôležitý proces, ktorý umožňuje množenie dôležitých fragmentov DNA organizmov. Vyžaduje sa spojenie špecifickej DNA s vektorovou DNA, aby sa vytvorila rekombinantná DNA, ktorá sa transformuje na hostiteľský organizmus. Vektor je molekula DNA, ktorá sa správa ako nosič na prenášanie cudzieho genetického materiálu do inej bunky alebo organizmu. Mal by byť schopný sa replikovať vo vnútri hostiteľského organizmu a vytvárať viacnásobné kópie rekombinantnej DNA. Pri klonovaní DNA sa používajú rôzne druhy vektorov. Kvasnicový umelý chromozóm (YAC) a fágový vektor M13 sú medzi nimi dva typy. Kľúčový rozdiel medzi fágovým vektorom YAC a M13 je taký YAC je umelý chromozóm, ktorý sa replikuje v kvasinkových bunkách zatiaľ čo Fágový vektor M13 je jednovláknová kruhová DNA bakteriofága M13, ktorá sa replikuje v E Coli bunky.

OBSAH
1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je to YAC
3. Čo je to fágový vektor M13
4. Porovnanie bok po boku - fágový vektor YAC vs M13
5. Zhrnutie

Čo je vektor YAC?

YAC je umelo vybudovaný chromozóm, ktorý má schopnosť niesť veľký segment cudzej DNA a replikovať sa v kvasinkových bunkách. Má centroméru, teloméru a autonómne sa replikujúce sekvencie nevyhnutné pre replikáciu a stabilitu. YAC by mal tiež niesť selektívny marker alebo markery a reštrikčné miesta, aby sa z neho stal účinný klonovací vektor. Veľké sekvencie v rozsahu od 1 000 kb do 2 000 kb sa môžu vložiť do YAC a preniesť do kvasiniek.

Obrázok 01: Vektor YAC

Čo je to fágový vektor M13?

Bakteriofág M13 je vírus, ktorý infikuje a replikuje sa v E Coli. Genom bakteriofága M13 je malý, približne 6,7 kb. Je to jednovláknová, kruhová a pozitívna DNA. Tento vírus špecificky infikuje E Coli baktérie cez F pilus. Akonáhle vstúpi do ssDNA do baktérie, syntetizuje svoje komplementárne vlákno a stáva sa dsDNA alebo replikatívnou formou (RF) M13. RF sa môže v hostiteľskom organizme správať ako plazmid. DsDNA sa replikuje vo vnútri E Coli a produkuje ssDNA nesúcu nové fágy. Tieto nové fágy sa postupne uvoľňujú z internetu E Coli bez zabitia hostiteľskej bunky. Infekcia však spomaľuje rast E Coli. dsDNA môže byť extrahovaná z bakteriálnych buniek a použitá ako vektory pri klonovaní DNA. Sú známe ako fágové vektory M13. Môžu sa ľahko manipulovať a použiť podobne ako plazmidové vektory.

Inherentná schopnosť infekcie týchto fágov M13 slúži ako dobrá kvalifikácia na použitie ako vektor pri klonovaní génov. Pri vývoji M13 do vektora by sa do jeho genómu malo začleniť niekoľko prvkov. Sú to gén pre lac represorový (lac I) proteín, operátorovo-proximálna oblasť lac Z gén, lac promótor a viac klonovacie miesto (polylinker). Pokiaľ sa ako vektory použije dsDNA M13, môže sa s ňou zaobchádzať ako s plazmidovým vektorom. Použitie ssDNA M13 má však výhody v sekvenovaní DNA a cielenej mutagenéze.

Pretože fágový vektor M13 nesie viac klonovacích miest v lacZ rekombinované vektory môžu byť ľahko identifikované skríningom modro / bielych kolónií na agarových platniach obsahujúcich IPTG a X-Gal. Modré plaky produkované na doštičkách neobsahujú rekombinované fágy. Preto môžu byť na účely klonovania vybrané fágy s inzertmi.

Obrázok 02: Bakteriofág M13

Aký je rozdiel medzi fágovým vektorom YAC a M13?

Fágový vektor YAC vs M13
YAC je geneticky upravený chromozóm, ktorý má schopnosť niesť veľký segment cudzej DNA a replikovať sa v kvasinkových bunkách..	Fágový vektor M13 je vírusový vektor vyvinutý bakteriofágom M13, ktorý sa používa na inzerciu cudzej DNA E Coli.
účel
YAC boli navrhnuté tak, aby klonovali veľké fragmenty genómovej DNA do kvasiniek.	Fágové vektory M13 sa používajú na inzerciu cudzej DNA E Coli.
Vložte dĺžku
YAC môžu obsahovať genómové inzerty s veľkosťou megabázy (1 000 kb - 2 000 kb).	Veľkosť vložiek je asi 1 500 bps.
stavba
YAC DNA sa ťažko čistí neporušená a vyžaduje vysokú koncentráciu na vytvorenie vektorového systému YAC.	Vyskytuje sa prostredníctvom cyklického fotosyntetického elektrónového reťazca.
stabilita
YAC je nestabilný.	Fágy M13 sa dajú ľahko extrahovať.
veľkosť
Enzýmy sú väčšie molekuly.	Fágy M13 sú stabilné ako YAC.

Zhrnutie - YAC vs M13 Phage Vector

YAC je umelo skonštruovaný vektorový systém využívajúci špecifickú oblasť kvasinkového chromozómu na vloženie veľkých segmentov genetického materiálu do kvasinkových buniek. Fágový vektor M13 je vektorový systém odvodený od bakteriofágu M13, ktorý ho používa E coli ako hostiteľský organizmus. Toto je hlavný rozdiel medzi fágovým vektorom YAC a M13. Obidve sú rovnako užitočné v technológii rekombinantnej DNA a klonovaní génov.

referencie:
1. "Vector". Genetika-poznámky - vektor. N.p., n.d. Web. 16. mája 2017. https://genetics-notes.wikispaces.com/Vector
2. „Kvasinkový umelý chromozóm.“ Wikipedia. Nadácia Wikimedia Foundation, 21. apríla 2017. Web. 16. mája 2017. .

S láskavým dovolením:
1. „M13B“ Autorom J3D3 - vlastné dielo (CC BY-SA 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia