Rozdiel medzi priamou a nepriamou ELISA

Kľúčový rozdiel - priamy verzus nepriamy test ELISA

Enzymaticky viazaný imunotest (ELISA), známy tiež ako enzýmový imunotest, je sérologický test, ktorý zisťuje protilátky v krvi.. Používa sa ako diagnostický nástroj na zistenie, či bol pacient vystavený určitému typu vírusu alebo inému infekčnému činidlu (antigénu) a či telo vytvorilo protilátky proti infekcii. ELISA dokáže identifikovať aj minulé a súčasné infekcie. ELISA sa preto lekári často používajú ako predbežný skríningový test pred hĺbkovou analýzou chorôb. Tento test sa môže vykonať v laboratóriu odobratím vzorky krvi od pacienta. Existujú dva typy testu ELISA: priamy test ELISA a nepriamy test ELISA. Kľúčový rozdiel medzi priamym a nepriamym testom ELISA je ten nepriama ELISA je citlivejšia a vyžaduje si pridanie sekundárnej protilátky zatiaľ čo priama ELISA je menej citlivý a používa iba primárnu protilátku.

OBSAH
1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je to priama ELISA
3. Čo je nepriama ELISA
4. Porovnanie bok po boku - priame verzus nepriame ELISA
5. Zhrnutie

Čo je to priama ELISA?

ELISA je diagnostický test choroby, ktorý sa vykonáva na identifikáciu prítomnosti konkrétnych antigénov alebo protilátok v krvi. Uskutočňuje sa ako test na doštičke. Používa protilátky spojené s ľahko testovanými enzýmami. Prítomnosť antigénov vo vzorke séra sa viaže so špecifickými protilátkami spojenými s enzýmami. V poslednom kroku sa pridá špecifický substrát, ktorý reaguje s enzýmom. Enzým premieňa substrát na farebný produkt alebo produkt produkujúci signál. Zmena farby v chemickom substráte odhaľuje prítomnosť konkrétnej protilátky vo vzorke séra. Priamy test ELISA používa iba primárnu protilátku spojenú s enzýmom. Po naviazaní na antigén rýchlo mení farbu, čo naznačuje prítomnosť infekčného agens v krvi. Intenzita signálov je však v priamom teste ELISA slabšia, pretože epitopy sú obmedzené na viazanie antigénov. Preto je priama ELISA v porovnaní s nepriamou ELISA menej citlivá.

Obrázok 01: Priamy test ELISA

Čo je nepriama ELISA?

ELISA sa môže uskutočňovať s použitím dvoch typov protilátok; primárna protilátka a sekundárna protilátka. Nepriamy nástroj ELISA používa oba typy protilátok na zosilnenie signálov pre lepšiu detekciu. Nepriama technika ELISA sa uskutočňuje nasledujúcim spôsobom.

Doštičky sa inkubujú s antigénmi a premyjú sa, aby sa blokovala nešpecifická väzba.
Potom sa pridajú primárne protilátky a premyjú sa.
Pridajú sa enzýmové sekundárne protilátky a premyjú sa.
Pridá sa substrát a nechá sa reagovať s enzýmami.
Detegujú sa signály a identifikuje sa prítomnosť alebo neprítomnosť špecifického antigénu vo vzorke.

V nepriamom teste ELISA sa niekoľko sekundárnych protilátok môže viazať na jednu primárnu protilátku. Sekundárne protilátky sú spojené s ľahko testovanými enzýmami. Preto jedna väzba môže vydávať silný signál vďaka viac ako jednej interakcii. Preto je nepriama ELISA citlivejšia ako priama ELISA. Nepriama ELISA však môže vydávať nešpecifické signály v dôsledku skrížených reakcií sekundárnych protilátok.

Obrázok 02: Nepriamy test ELISA

Aký je rozdiel medzi priamym a nepriamym testom ELISA?

Priamy verzus nepriamy test ELISA
Priamy test ELISA je v porovnaní s nepriamym testom ELISA menej citlivý.	Nepriama ELISA je citlivejšia.
Čas odobratý
Priamy test ELISA je rýchly proces.	Nepriama ELISA je časovo náročná.
Použitie protilátok
V priamom teste ELISA sa používa iba jeden typ protilátok (primárne protilátky).	Primárne a sekundárne protilátky sa používajú na nepriamu ELISA.
Spojenie s enzýmami
Primárne protilátky sú spojené s enzýmami.	Sekundárne protilátky sú spojené s enzýmami.
Krížová reaktivita druhých protilátok
Priama ELISA eliminuje skríženú reaktivitu druhých protilátok.	Nepriama ELISA je ovplyvnená skríženou reaktivitou druhých protilátok.
signály
Signály sú slabé v porovnaní s nepriamym testom ELISA.	Signály sú zosilnené nepriamym testom ELISA. Preto je ľahké ich zistiť.

Zhrnutie - priame verzus nepriame ELISA

ELISA je biochemická technika používaná hlavne v imunológii na detekciu prítomnosti protilátky alebo antigénu vo vzorke krvi pacienta. Môže sa vykonať dvoma spôsobmi známymi ako priama alebo nepriama ELISA. Priamy test ELISA používa na detekciu antigénu iba primárne protilátky, zatiaľ čo nepriamy test ELISA používa primárne aj sekundárne protilátky. V priamom teste ELISA sú primárne protilátky značené, zatiaľ čo v nepriamom teste ELISA sú značené sekundárne protilátky. Toto je rozdiel medzi priamym a nepriamym testom ELISA.

Referencie
1. „Enzýmový imunosorbentový test (ELISA).“ Bulletin Svetovej zdravotníckej organizácie. U.S. National Library of Medicine, 1976. Web. 29.03.2017
2. Loon, A. M. van, J. T. Van Der Logt, F. W. Heessen a J. Van Der Veen. „Enzymaticky viazaný imunosorbentový test, ktorý používa značený antigén na detekciu imunoglobulínových protilátok M a A v toxoplazmóze: porovnanie s nepriamym imunofluorescenčným a imunosorbentom spojeným s dvojitým sendvičom.“ Žurnál klinickej mikrobiológie. U.S. National Library of Medicine, jún 1983. Web. 29.03.2017

S láskavým dovolením:
1. „Schéma ELISA“ od Cavitri - Vlastná práca (CC BY 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia
2. „Nepriama ELISA“ od Cawang - vlastná práca (CC0) prostredníctvom Commons Wikimedia

Veda a príroda