Rozdiel medzi imunofluorescenciou a imunohistochémiou

Kľúčový rozdiel - imunofluorescencia verzus imunohistochémia
 

Diagnostika chorôb, ktorá využíva molekulárne biologické metódy, sa stala rozvíjajúcou sa oblasťou technológie klinického laboratória. Zahŕňa všetky testy a metódy na identifikáciu choroby a pochopenie príčiny choroby pomocou analýzy DNA, RNA alebo exprimovaných proteínov v organizme. Rýchly pokrok v molekulárnej diagnostike umožnil základný výskum prenosných a neprenosných chorôb. Tieto sa používajú na stanovenie zmien v sekvenčných alebo expresných hladinách v rozhodujúcich génoch alebo proteínoch zapojených do choroby. Imunofluorescencia (IF) a imunohistochémia (IHC) sú dve tak často používané techniky v biológii rakoviny.. IF je typ IHC, pri ktorom sa na analýzu monoklonálnych a polyklonálnych protilátok používa metóda detekcie fluorescencie, zatiaľ čo metóda IHC používa na detekciu monoklonálnych a polyklonálnych protilátok metódy založené na chemikáliách. Toto je kľúčový rozdiel medzi IF a IHC.

OBSAH

1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je imunofluorescencia 
3. Čo je imunohistochémia
4. Podobnosti medzi imunofluorescenciou a imunohistochémiou
5. Porovnanie bok po boku - imunofluorescencia vs. imunohistochémia v tabuľkovej forme
6. Zhrnutie

Čo je imunofluorescencia (IF)?

Imunofluorescencia je detekčná technika, pri ktorej sa protilátky použité v teste označia pomocou fluorescenčných farbív alebo fluorescenčných proteínov na účely detekcie. Značené sekundárne protilátky môžu viesť k nežiadúcim signálom pozadia; preto je technika IF založená na značení samotnej primárnej protilátky, aby sa zabránilo nežiadúcim signálom počas detekcie. Touto technikou sa zabráni nešpecifickej väzbe medzi primárnou a sekundárnou protilátkou a je to rýchlejšie, pretože nie je zahrnutý žiadny sekundárny inkubačný krok. Zlepšila sa aj kvalita údajov.

Obrázok 01: Dvojité imunofluorescenčné farbenie pre BrdU, NeuN a GFAP

Fluórchrómy alebo fluorescenčné farbivá sú zlúčeniny, ktoré môžu absorbovať žiarenie, výhodne ultrafialové žiarenie, ktoré je excitované. Keď častice dosiahnu základný stav z excitovaného stavu, emitujú žiarenie, ktoré je zachytené a detekované detektorom na vytvorenie spektra. Je veľmi dôležité, aby fluorescenčná značka bola kompatibilná a stabilná pre konkrétnu reakciu a mala by byť správne konjugovaná s protilátkou, aby sa získali presné výsledky. Jedným z najpoužívanejších fluórchrómov je fluoresceín izotiokyanát (FITC), ktorý je zelenej farby, s absorpčnými a emisnými maximálnymi vlnovými dĺžkami 490 nm a 520 nm. Rhodamín, ďalšie činidlo používané v IF, má červenú farbu a má zreteľné absorpčné a emisné vrcholové vlnové dĺžky 553 nm a 627 nm.

Čo je imunohistochémia (IHC)?

IHC je metóda molekulárneho testovania používaná na identifikáciu a potvrdenie prítomnosti antigénu v cieľovej bunke. Cieľovou bunkou môže byť infekčná častica, mikrobiálny patogén alebo malígna nádorová bunka. IHC využíva monoklonálne a polyklonálne protilátky na stanovenie prítomnosti antigénov prítomných na bunkovom povrchu cieľových buniek. Táto technika je založená na väzbe antigén-protilátka. Detekčný marker je konjugovaný s týmito protilátkami, aby sa detegovala prítomnosť alebo neprítomnosť konkrétneho antigénu. Týmito značkami môžu byť chemické markery, ako sú enzýmy, fluorescenčné značené protilátky alebo rádioaktívne značené protilátky.

Obrázok 02: Plátok myši a mozgu zafarbené imunohistochémiou

Najobľúbenejšou aplikáciou IHC je biológia rakovinových buniek na identifikáciu prítomnosti zhubných nádorov, ale používa sa aj na detekciu infekčných chorôb..

Aké sú podobnosti medzi imunofluorescenciou a imunohistochémiou?

• Imunofluorescencia a imunohistochémia sa uskutočňujú v podmienkach in vitro.
• Obe techniky sú založené na antigén-protilátka
• Obaja sú veľmi rýchle techniky.
• Výsledky týchto techník sú reprodukovateľné.
• Obe zlepšili kvalitu údajov.
• Tieto techniky sa používajú pri diagnostike rakoviny a infekčných chorôb.

Aký je rozdiel medzi imunofluorescenciou a imunohistochémiou?

Imunofluorescencia vs. imunohistochémia
IF je detekčná technika, kde protilátky použité v teste sú na detekciu značené pomocou fluorescenčných farbív alebo fluorescenčných proteínov.	IHC je detekčná technika, pri ktorej sa protilátky použité v teste označia pomocou chemikálií alebo rádioaktívnych prvkov na detekciu.
presnosť
Presnosť je vyššia v technike IF v porovnaní s IHC.	Presnosť v IHC je nižšia.
špecifickosť
IF je špecifickejší.	IHC je menej špecifický.

Zhrnutie - Imunofluorescencia vs. imunohistochémia

Molekulárne mechanizmy priniesli mnoho zmien v oblasti medicíny, čo viedlo k pokročilým metódam molekulárneho testovania, ktoré priniesli revolúcie v oblasti diagnostiky. Tieto vynálezy viedli k rýchlej a presnej identifikácii a potvrdeniu choroby, čo umožnilo úspešné podávanie a výrobu liekov. Tieto techniky sa používajú aj vo farmakológii s cieľom nájsť ciele liečiv a potvrdiť farmakokinetické vlastnosti liečiva počas metabolizmu liečiva. IF a IHC sú dve diagnostické metódy, ktoré sú založené na koncepcii väzby antigénu a protilátky, hoci spôsob detekcie sa u oboch techník líši. IF používa princíp fluorescencie na detekciu antigénu a IHC používa koncept chemickej konjugácie na detekciu antigénu. Toto je rozdiel medzi IF a IHC.

Stiahnite si verziu imunofluorescencie PDF verzus imunohistochémia vo formáte PDF

Môžete si stiahnuť verziu tohto článku vo formáte PDF a použiť ju na účely offline podľa citácie. Stiahnite si PDF verziu tu Rozdiel medzi imunofluorescenciou a imunohistochémiou.

Referencie:

1. Aoki, Valéria a kol. „Priama a nepriama imunofluorescencia.“ Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, k dispozícii tu. Prístup k 25. augustu 2017.
2. Duraiyan, Jeyapradha a kol. „Aplikácie imunohistochémie“. Vestník farmaceutických a biologických vied, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, august 2012, k dispozícii tu. Prístup k 25. augustu 2017.

S láskavým dovolením:

1. „Dvojité imunofluorescenčné farbenie pre BrdU, NeuN a GFAP“ Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2., Liu X. - Intranazálne dodanie transformujúceho rastového faktora - beta1 u myší po mŕtvici znižuje objem infarktu a zvyšuje neurogenézu v subventrikulárnej zóne; PMID 19077183 (CC BY 2.0) prostredníctvom Commons Wikimedia
2. „Hypotalamus myšacieho tkaniva zafarbeného ABC-imunohistochémiou“ Zabbn - Vlastná práca (CC BY-SA 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia