Rozdiel medzi nitrocelulózou a nylonovou membránou

Kľúčový rozdiel - nitrocelulóza verzus nylonová membrána
 

Blotovanie je dôležitou technikou na detekciu špecifických sekvencií DNA, RNA a proteínov z ich zmesí v molekulárnej biológii. Uskutočňuje sa to pomocou membrány zvanej blot. Existujú rôzne techniky prenosu, napríklad severné, južné a západné prenosy. Výber vhodnej membrány pre blotovací proces by sa mal starostlivo vykonať, aby sa zabránilo nešpecifickej väzbe a nesprávnej detekcii. Nitrocelulóza, nylon a PVDF sú bežne používané membrány v blotovacích technikách. Majú rôzne vlastnosti. Kľúčový rozdiel medzi nitrocelulózou a nylonovou membránou je ten nitrocelulózové membrány majú vysoký potenciál imobilizácie proteínov kdežto nylonové membrány majú vysoký potenciál imobilizácie nukleových kyselín. Obidva typy membrán sa však často používajú v blotovacích technikách.

OBSAH
1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je to nitrocelulózová membrána
3. Čo je to nylonová membrána
4. Porovnanie bok po boku - nitrocelulóza verzus nylonová membrána
5. Zhrnutie

Čo je to nitrocelulózová membrána?

Nitrocelulózová membrána je bežne používaný membránový filter v technikách nukleových kyselín a proteínov. Má vysoký väzbový potenciál na proteíny. Preto sa nitrocelulózové membrány široko používajú v technike westernového prenosu. Nitrocelulózové membrány sú kompatibilné so všetkými hybridizačnými technikami a vykazujú vynikajúce väzbové kapacity bez interferencií. Nitrocelulózové membrány sú prirodzene hydrofilné. Vytvárajú hydrofilnú interakciu s molekulami a účinne imobilizujú ich na membráne. Komerčné nitrocelulózové membrány sú dostupné v dvoch veľkostiach pórov: 0,45 a 0,2 um.

Obrázok 01: Nitrocelulózová membrána použitá pri westernovom prenose

Čo je to nylonová membrána?

Nylonová membrána je ďalším typom komerčnej membrány používanej pri blotovacích technikách. Alternatívne sa používa s nitrocelulózovými membránami na južný a severný prenos. Nylonové membrány sú ideálne pre Southern blotting ako nitrocelulóza kvôli ich vysokej afinite k väzbe na DNA. Kvôli niekoľkým jedinečným vlastnostiam nylonových membrán, vedci bežne používajú nylonové membrány pre južné a severné prenosy namiesto cez nitrocelulózovú membránu. Na rozdiel od nitrocelulózy sa nylonové membrány tiež odporúčajú na stripovanie a opätovné sondovanie.

Obrázok 02: Nylonová membrána použitá na južný prenos

Aký je rozdiel medzi nitrocelulózou a nylonovou membránou?

Nitrocelulóza vs nylonová membrána
Nitrocelulózové membrány sú krehké.	Nylonové membrány sú menej krehké.
Manipulácia
Ťažko sa s nimi manipuluje.	Ľahko sa s nimi manipuluje.
Reprobing
Nepodporované nitrocelulózové membrány sa ťažko reprobehujú.	Opakovanie pokusu je ľahké s nylonovými membránami.
Kompatibilita s rôznymi podmienkami skladovania
Nitrocelulózové membrány majú menšiu pevnosť, aby vydržali rôzne podmienky skladovania.	Nylonové membrány odolnejšie reagujú na rôzne podmienky skladovania.
použitie
Vyžaduje sa predbežné navlhčenie.	Predpúšťanie nie je potrebné pre nylonové membrány.
Hydrofilná príroda
Nitrocelulózové membrány majú hydrofilnú povahu, ale sú menej hydrofilné ako nylonové membrány.	Sú svojou povahou vysoko hydrofilné.
Potenciál imobilizácie
Nitrocelulózové membrány majú menšiu afinitu k nukleovým kyselinám. Má však vysokú afinitu k proteínom.	Nylonové membrány majú s nukleovými kyselinami vysoký väzbový potenciál ako nitrocelulózové membrány.

Zhrnutie - nitrocelulóza vs nylonová membrána

Nitrocelulózové a nylonové membrány sú špeciálne fólie používané v technike pijania na reprodukciu vzorov pruhov na géli. Umožňujú detekciu špecifickej sekvencie alebo proteínu zo zmesí imobilizáciou na membráne. Keď sú molekuly imobilizované na membráne, môžu sa použiť ako substrát pre hybridizačnú analýzu so značenými sondami. Nitrocelulózová membrána sa bežne používa na detekciu proteínov technikou westernového prenosu z dôvodu jej vysokej väzbovej afinity k proteínom. Nylonové membrány sa často používajú na južný a severný prenos. Toto je rozdiel medzi nitrocelulózou a nylonovou membránou.

Referencie:
1. Hayes, P. C., C. R. Wolf, a J. D. Hayes. „Blotovacie techniky na štúdium DNA, RNA a proteínov.“ BMJ: British Medical Journal. US National Library of Medicine, 14. októbra 1989. Web. 07. apríl 2017
2. Mahmood, Tahrin a Ping-Chang Yang. "Western Blot: technika, teória a riešenie problémov." North American Journal of Medical Sciences. Medknow Publications & Media Pvt Ltd, september 2012. Web. 07. apríl 2017

S láskavým dovolením:
1. „Western blot transfer“ Autor: Bensaccount na anglickej Wikipédii (CC BY 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia