Rozdiel medzi nitrocelulózou a PVDF

Kľúčový rozdiel - nitrocelulóza verzus PVDF
 

Western blotting je metóda, ktorá umožňuje detekciu a kvantifikáciu špecifických proteínov zo vzorky proteínov. Spoľahlivosť techniky závisí od výberu správnej membrány na absorpciu proteínov z gélu. Existujú rôzne typy mikroporéznych membrán. Nitrocelulózové a PVDF membrány sú dve také membrány, ktoré výskumníci uprednostňujú kvôli ich špeciálnym vlastnostiam pred ostatnými typmi membrán. Výber medzi nitrocelulózou alebo PVDF je tiež ďalšou výzvou pri westernovom prenose. Nitrocelulóza aj PVDF majú vysokú absorpčnú kapacitu proteínov. Kľúčový rozdiel medzi nitrocelulózovou a PVDF membránou je ten nitrocelulózové membrány nemajú schopnosť odstraňovať protilátky a opakovane používať membránu na opakované testovanie protilátok, zatiaľ čo membrány PVDF majú schopnosť odstraňovania a opätovného použitia.

OBSAH
1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je nitrocelulóza
3. Čo je PVDF
4. Porovnanie bok po boku - nitrocelulóza verzus PVDF
5. Zhrnutie

Čo je nitrocelulóza?

Nitrocelulóza je polymér vyrobený spracovaním celulózy s kyselinou dusičnou a používa sa na výrobu mikroporéznych membrán v molekulárnej biológii, najmä na techniky blotovania, ako je napríklad južná, severná a západná blotting. Veľkosti pórov nitrocelulózových membrán sú v rozsahu od 3 do 20 um. Nitrocelulózové mikroporézne membrány uľahčujú detekciu imunochemickej reakcie na povrchu membrány. Preto sa nitrocelulózové membrány často používajú na imobilizáciu proteínov a detekciu špecifických proteínov pri westernovom prenose. Nitrocelulózové membrány môžu tiež imobilizovať glykoproteíny a nukleové kyseliny.

Nitrocelulózové membrány sú výhodné v laterálnych prietokových testoch kvôli niekoľkým znakom. Nitrocelulózové membrány absorbujú proteíny vo vysokej koncentrácii. Rozpúšťadlo použité na zvlhčenie membrány neznižuje absorpciu nitrocelulózového membránového proteínu. Nitrocelulózové membrány sa môžu ľahko narezať na požadovanú veľkosť gélu a prenášať proteíny z gélu na membránu elektrickým alebo kapilárnym prenosom. Nitrocelulóza umožňuje rýchlejší tok proteínov cez membránu s vysokým väzbovým potenciálom. Nitrocelulóza vykazuje zlepšenú pevnosť pri manipulácii. Ďalším zvláštnym atribútom nitrocelulózovej membrány je to, že sa dá ľahko prilepiť pomocou nerozpustných vo vode odolných lepidiel na rôzne plastové podklady..

Obrázok 01: Nitrocelulózová membrána pre westernový prenos

Čo je to PVDF?

Polyvinylidéndifluorid (PVDF) je fluórpolymér vyrobený polymerizáciou vinylidéndifluoridu a má vysokú schopnosť imobilizácie proteínov. Preto sa mikroporézne membrány vyrobené z PVDF používajú v technikách westernového prenosu na analýzu špecifických proteínov zo zmesí proteínov. Membrány PVDF sa môžu tiež použiť na analýzu aminokyselín a sekvenovanie proteínov. Najdôležitejšou charakteristikou PVDF membrány nad nitrocelulózovou membránou je to, že sa môže ľahko odobrať z protilátok a znovu použiť na následné protilátkové sondy..

Membrány PVDF sú hrubšie ako nitrocelulózové membrány; preto je odolnejšie voči poškodeniu pri opakovanom použití. Membrány PVDF sú vysoko hydrofóbne. Preto sa musia pred použitím namočiť do metanolu alebo izopropanolu.

Aký je rozdiel medzi nitrocelulózou a PVDF?

Nitrocelulóza verzus PVDF
Nitrocelulóza je polymér zložený z celulózy.	PVDF je fluórpolymér vyrobený polymerizáciou vinylidéndifluoridu.
Veľkosť pórov membrány
Typické veľkosti pórov sú 0,1, 0,2 alebo 0,45 um	Typické veľkosti pórov sú 0,1, 0,2 alebo 0,45 um
Väzbová kapacita na proteíny
Nitrocelulóza má väzbovú kapacitu proteínov 80 až 100 μg / cm2.	PVDF má kapacitu viazania proteínov 170 až 200 μg / cm2.
citlivosť
To má nízku citlivosť v porovnaní s PVDF.	To má vysokú citlivosť.
Detekcia nízko exprimovaných proteínov
Pretože citlivosť nitrocelulózových membrán je nízka, nie je vhodná na detekciu slabo exprimovaných proteínov.	Toto je vhodnejšie na detekciu slabo exprimovaných proteínov kvôli svojej vysokej citlivosti.
Hluk pozadia
To má nižší šum na pozadí	To má vyšší šum na pozadí.
Interakcie s proteínmi
Proteínové molekuly sa viažu na nitrocelulózové membrány hydrofóbnymi interakciami.	Proteíny sa viažu na PVDF membrány prostredníctvom hydrofóbnych a dipólových interakcií.
Povaha membrány
Nitrocelulóza je krehká a krehká. Dostupné sú však verzie nitrocelulózy a sú odolné.	PVDF je trvanlivejší a má vyššiu chemickú odolnosť.
Schopnosť odstrániť a znovu použiť
Nitrocelulóza môže mať problémy so stripovaním a opätovným pôsobením bez straty signálu.	PVDF je ideálny na opakované testovanie a sekvencovanie aplikácií.
vhodnosť
Nitrocelulóza je ideálna na detekciu proteínov s nízkou molekulovou hmotnosťou.	PVDF je vhodnejší na detekciu proteínov s vyššou molekulovou hmotnosťou.
Iné použitia
Nitrocelulóza sa môže použiť na analýzu nukleových kyselín a blotovanie bodkami / štrbinami.	PVDF sa môže použiť na proteínové sekvenovanie a systémy na stanovenie pevnej fázy.
náklady
To je lacnejšie ako PVDF membrány.	To je drahšie ako nitrocelulózové membrány.
Potreba predbežného navlhčenia
Nitrocelulózové membrány nevyžadujú predbežné spracovanie metanolom	Membrány PVDF vyžadujú predbežné spracovanie metanolom.

Zhrnutie - Nitrocelulóza verzus PVDF

Nitrocelulózové membrány boli prvé membrány komerčne používané na stanovenie laterálneho toku. Majú vysokú schopnosť absorbovať proteíny. Preto sa pri westernovom prenose používajú nitrocelulózové membrány. PVDF je ďalší typ membrány používanej pri westernovom prenose a má tiež vysokú absorpčnú kapacitu proteínov. Oba typy sa používajú pri analýze Western blotting na analýzu proteínov. Membrány PVDF však majú viac špeciálnych atribútov, vďaka čomu sú vhodnejšie ako nitrocelulózové membrány na westernový prenos. Avšak nitrocelulózové membrány sú vhodnejšie na detekciu proteínov s nízkou molekulovou hmotnosťou, membrány PVDF sú vhodnejšie na detekciu proteínov s vysokou molekulovou hmotnosťou. Toto je rozdiel medzi nitrocelulózovými a PVDF membránami.

S láskavým dovolením:
1. „Western blot transfer“ Autor: Bensaccount na anglickej Wikipédii (CC BY 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia

referencie:
1.Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun a Thomas A. Neubert. „Použitie nitrocelulózových membrán na charakterizáciu proteínov pomocou hmotnostnej spektrometrie s laserovou desorpciou / ionizáciou pomocou laserovej desorpcie.“ Analytická chémia. US National Library of Medicine, 15. júla 2006. Web. 28.03.2017
2. „Molekulárne markery a rastlinná biotechnológia“. Knihy Google. N.p., n.d. Web. 28.03.2017
3. pondelok, 8. apríla 2013 Tweet. "Kúzlo je v membráne: Vyberte si múdro pre najlepšie výsledky westernového prenosu." Biocompare. N.p., 8. apríla 2013. Web. 28.03.2017