Rozdiel medzi tenkou vrstvou papiera a stĺpcovou chromatografiou

Kľúčový rozdiel - papier vs tenká vrstva vs stĺp chromatografie
 

Papierová chromatografia, chromatografia na tenkej vrstve a stĺpcová chromatografia sú tri typy chromatografických techník. kľúčový rozdiel medzi papierovou chromatografiou, chromatografiou na tenkej vrstve a stĺpcovou chromatografiou sa vychádza z typu stacionárnej fázy použitej v chromatografickej technike. Papierová chromatografia používa ako stacionárnu fázu celulózový papier, chromatografia na tenkej vrstve používa ako stacionárnu fázu oxid hlinitý alebo silikagél, zatiaľ čo stĺpcová chromatografia používa ako stacionárnu fázu kolónu naplnenú vhodným materiálom matrice..

V procese separácie a identifikácie biomolekúl, ako sú proteíny a sacharidy, je dôležitou biofyzikálnou technikou chromatografia. Chromatografia oddeľuje zlúčeniny na základe ich rozpustnosti, veľkosti a náboja. Na základe separačného mechanizmu používa chromatografia mechanizmy, ako je iónová výmena, absorpcia, rozdelenie a vylučovanie podľa veľkosti a existujú tri chromatografické techniky; menovite papierová, tenká vrstva a stĺpcová chromatografia. Papierová chromatografia je založená na adsorpcii tuhá látka-kvapalina a rozpustnosti zlúčeniny a ako stacionárna fáza sa používa celulózový papier. Chromatografia na tenkej vrstve je založená na adsorpcii molekúl tuhá látka-kvapalina. Má stacionárnu fázu, ktorá je zvyčajne vyrobená z oxidu hlinitého alebo silikagélu a mobilnú fázu, ktorou je rozpúšťadlo. Stĺpcová chromatografia používa stĺpec naplnený matricou, ktorá sa používa na oddelenie molekúl hlavne na základe ich veľkosti, afinity alebo náboja.

OBSAH

1. Prehľad chromatografie a kľúčové rozdiely
2. Čo je to papierová chromatografia
3. Čo je tenkovrstvová chromatografia
4. Čo je stĺpcová chromatografia
5. Podobnosti medzi papierom, tenkou vrstvou a stĺpcovou chromatografiou
6. Porovnanie bok po boku - papier verzus tenká vrstva verzus stĺpcová chromatografia v tabuľkovej forme
7. Zhrnutie

Čo je to papierová chromatografia?

Papierová chromatografia je najjednoduchší typ použitej chromatografie a nepoužíva sa pri rozsiahlom výskume. Používa sa najmä v študentských laboratóriách na identifikáciu biomolekúl, ako sú aminokyseliny a uhľohydráty prítomné v zmesiach. Papierová chromatografia používa stacionárnu fázu, ktorá sa vyrába z celulózového papiera alebo filtračného papiera Whatman, a mobilnú fázu, ktorá sa zvyčajne pripravuje s použitím organických rozpúšťadiel, ako je n-butanol atď. Stacionárna fáza sa nasýti vodou, čím sa stacionárna fáza stáva kvapalnou. Teda, keď sú zlúčeniny bodkované a nechané bežať v prítomnosti mobilnej fázy, v závislosti od rozpustnosti zlúčenín, sú separované. Teda po vývoji chromatogramu sa môže zafarbiť, aby sa stanovila dĺžka pokusu o dĺžku každej zlúčeniny. Týmto sa dá vypočítať retenčný faktor.

Obrázok 01: Papierová chromatografia

Papierová chromatografia sa môže ďalej klasifikovať ako stúpajúca papierová chromatografia a zostupná papierová chromatografia v závislosti od smeru tečúceho rozpúšťadla.

Čo je tenkovrstvová chromatografia?

Chromatografia na tenkej vrstve alebo TLC je bežne používaná technika na identifikáciu rôznych aminokyselín prítomných v zmesi alebo na identifikáciu proteínov. Technika separácie je založená na adsorpcii tuhá látka-kvapalina. Pri chromatografii na tenkej vrstve sa ako stacionárna fáza použije platnička vyrobená z oxidu hlinitého alebo silikagélu. Zmes rozpúšťadiel sa mení podľa požiadavky a na prípravu rozpúšťadla sa môžu použiť rôzne kombinácie organických zlúčenín, ako je n-butanol, kyselina octová a voda. Zlúčeniny, ktoré sa majú separovať, sa nanesú na platňu a ponoria sa do zmesi rozpúšťadiel. Akonáhle sa rozpúšťadlo vztiahne nahor na základe kapilárneho účinku daného doštičkou, zlúčeniny, ktoré sa objavia na doštičke, sa tiež pohybujú v závislosti od ich rozpustnosti v rozpúšťadle.

Obrázok 02: Chromatografia na tenkej vrstve

Detekcia škvŕn po chromatograme sa vykonáva rôznymi postupmi farbenia. Niektorí používajú ninhydrínové zafarbenie, čo je dosť toxická metóda zafarbenia. Moderné tenkovrstvové chromatogramy používajú fluorescenčné techniky na zobrazenie chromatogramu po cykle. V závislosti od prejdených vzdialeností sa môže vypočítať retenčný čas každej zlúčeniny. Toto sa môže použiť na identifikáciu typu zlúčeniny separovanej na základe použitej zmesi. TLC sa používa hlavne na identifikáciu aminokyselín v proteínovej zmesi a tiež na oddelenie rôznych typov monosacharidov prítomných v zmesi..

Čo je stĺpcová chromatografia?

Stĺpcová chromatografia je všeobecný pojem, ktorý sa používa na opis mnohých typov chromatografických techník, ktoré používajú metódu separácie založenú na kolóne. Pri stĺpcovej chromatografii sa na oddelenie zlúčenín použije fyzikálny stĺpec s náplňovým materiálom. Separácia môže byť založená na rôznych fyzikálnych vlastnostiach vykazovaných zlúčeninami. Týmito vlastnosťami môžu byť náboj, veľkosť, 3D konformácia a väzbová kapacita atď. Stĺpec naplnený matricovým materiálom teda pôsobí ako stacionárna fáza a premývací pufor aplikovaný na kolónu pôsobí ako mobilná fáza..

Ak sú molekuly separované na základe veľkosti, baliaci materiál je balený takým spôsobom, že zanecháva póry, cez ktoré môžu zlúčeniny prechádzať. Väčšie molekuly, ktoré nemôžu prúdiť cez póry, sa eluujú ako prvé, zatiaľ čo menšie molekuly sa eluujú omnoho dlhšie.

Obrázok 03: Chromatografia na kolóne

Ak sú molekuly separované na základe ich náboja, stacionárna fáza bude obsahovať buď aniónový alebo katiónový menič, do ktorého budú zlúčeniny na základe svojho náboja priťahované. V priebehu premývacieho kroku sa teda neviazané zlúčeniny eluujú. Po pridaní elučného pufra sa naviazané nabité zlúčeniny eluujú. Detekcia týchto eluentov je väčšinou založená na spektrofotometrických technikách.

Aké sú podobnosti medzi tenkou vrstvou papiera a stĺpcovou chromatografiou?

• Na separáciu biomolekúl, ako sú aminokyseliny, proteíny a uhľohydráty, sa používajú všetky tri metódy tenkej vrstvy papiera a chromatografie na stĺpci..
• Techniky tenkovrstvovej a kolónovej chromatografie na papieri majú mobilnú fázu a stacionárnu fázu.
• Techniky tenkovrstvovej a stĺpcovej chromatografie na papieri používajú na separáciu biofyzikálne mechanizmy.

Aký je rozdiel medzi tenkou vrstvou papiera a stĺpcovou chromatografiou?

Chromatografia papiera a tenkej vrstvy vs.
Papierová chromatografia	Papierová chromatografia je chromatografická technika, ktorá sa používa na oddelenie zlúčenín na základe adsorpcie kvapalina-kvapalina a rozpustnosti zlúčeniny. Ako stacionárnu fázu používa celulózový papier.
Tenkovrstvová chromatografia	Chromatografia na tenkej vrstve je ďalšou chromatografickou technikou založenou na adsorpcii molekúl tuhá látka-kvapalina. Má stacionárnu fázu vyrobenú z oxidu hlinitého alebo silikagélu a rozpúšťadlo ako mobilnú fázu, ktorým je rozpúšťadlo.
Stĺpcová chromatografia	Stĺpcová chromatografia používa stĺpec naplnený matricou, ktorá sa používa na oddelenie molekúl hlavne na základe ich veľkosti, afinity alebo náboja.
Stacionárna fáza
Papierová chromatografia	Papier vyrobený z nitrocelulózy Whatman sa používa ako stacionárna fáza v papierovej chromatografii.
Tenkovrstvová chromatografia	Ako stacionárna fáza chromatografie na tenkej vrstve sa používa oxid hlinitý alebo silikagél.
Stĺpcová chromatografia	Ako stacionárna fáza v stĺpcovej chromatografii sa používa kolóna naplnená vhodným obalovým materiálom.
Mobilná fáza
Papierová chromatografia	Bežné rozpúšťadlo je mobilná fáza papierovej chromatografie.
Tenkovrstvová chromatografia	Bežné rozpúšťadlo je mobilná fáza chromatografie na tenkej vrstve.
Stĺpcová chromatografia	Premývací pufor je mobilnou fázou stĺpcovej chromatografie.
Mechanizmy používané na oddelenie
Papierová chromatografia	Papierová chromatografia je založená na absorpcii tuhá látka-kvapalina.
Tenkovrstvová chromatografia	Chromatografia na tenkej vrstve je založená na absorpcii tuhá látka-kvapalina.
Stĺpcová chromatografia	Stĺpcová chromatografia je založená na vylúčení veľkosti, náboji a tvare.
Elučný pufor
Papierová chromatografia	Papierová chromatografia sa nevyžaduje.
Tenkovrstvová chromatografia	Nevyžaduje sa pre chromatografiu na tenkej vrstve.
Stĺpcová chromatografia	Vyžaduje sa v stĺpcovej chromatografii.
odhalenie
Papierová chromatografia	Farbenie a stanovenie retenčného faktora.
Tenkovrstvová chromatografia	Farbenie a stanovenie retenčného faktora.
Stĺpcová chromatografia	Spektrofotometrické stanovenie.

zhrnutie - Tenká vrstva papiera vs stĺp chromatografie

Papierová chromatografia, TLC a stĺpcová chromatografia sú separačné techniky používané na separáciu biomolekúl, ako sú proteíny, aminokyseliny a uhľohydráty (najmä monosacharidy). Papierová chromatografia používa ako stacionárnu fázu celulózový papier a mechanizmus separácie je založený na adsorpcii tuhá látka-kvapalina. TLC tiež používa adsorpčné mechanizmy pevná látka-kvapalina. Molekuly sú separované v stacionárnej fáze v závislosti od ich rozpustnosti v mobilnej fáze. Stĺpcová chromatografia využíva na oddelenie fyzikálne vlastnosti, ako je veľkosť, tvar, náboj a molekulová hmotnosť zlúčeniny. Kolóna naplnená materiálom matrice pôsobí ako stacionárna fáza, zatiaľ čo premývací pufor pôsobí ako fáza rozpúšťadla. Toto je rozdiel medzi tenkou vrstvou papiera a stĺpcovou chromatografiou.

referencie:

1.Clark, Jim. "TENÁRSKA CHROMATOGRAFIA VRSTVENIA." Tenkovrstvová chromatografia, 2007. K dispozícii tu 
2.Coskun, Ozlem. „Separačné techniky: Chromatografia.“ Northern Clinics of Istanbul, Kare Publishing, 2016. K dispozícii tu 

S láskavým dovolením:

1. „Chromatografický tank“ (CC BY-SA 3.0) prostredníctvom Commons Wikimedia  
2.'Tlc sekvencia'By Quantockgoblin, (Public Domain), prostredníctvom Commons Wikimedia
3. „Stĺpcová chromatografia“ (Public Domain) prostredníctvom Commons Wikimedia