Rozdiel medzi PCR a PCR v reálnom čase

PCR vs PCR v reálnom čase

PCR alebo polymerázová reťazová reakcia je revolučným objavom v modernej molekulárnej biológii, ktorý bol prvýkrát vyvinutý chemikom Kary Mullisom v roku 1983. Umožňuje amplifikáciu jednej sekvencie v komplexnej DNA na analýzu. Základnou myšlienkou PCR je, že dva priméry, ktoré sú komplementárne s opačnými vláknami DNA sekvencie, sú orientované proti sebe; priméry produkujú komplementárne vlákna, z ktorých každý obsahuje druhý primer. Výsledkom je veľké množstvo sekvencie zodpovedajúcej DNA, ktorá leží medzi dvoma primermi. Enzým DNA polymeráza sa používa na predĺženie primerov v PCR. DNA polymeráza je termostabilný enzým a má schopnosť prežiť pri vysokých teplotách (94 až 95 ° C) používaných na denaturáciu templátovej DNA.

PCR zahŕňa tri kroky, konkrétne opakované kolá denaturácie, nasedanie primérov a syntézu DNA. Na uskutočnenie tejto reakcie sa používa termocykler, takže môže byť naprogramovaná na rýchlu a presnú zmenu teploty. Aplikácie PCR sú vyšetrovania trestných činov, odtlačky prstov DNA, detekcia patogénov a analýza DNA skorých ľudských druhov.

Čo je konvenčná PCR?

Existujú tri hlavné stupne konvenčnej PCR, a to; Fáza amplifikácie DNA, separácia PCR a detekcia produktov. Separácia segmentov DNA sa zvyčajne uskutočňuje elektroforézou na agarózovom géli. Produkty sa potom zafarbia etheiduim bromidom. Nakoniec sa detekcia dosiahne vizualizáciou prúžkov na géloch pod UV svetlom. Preto konečné výsledky konvenčnej PCR nie sú vyjadrené ako čísla. Bežná PCR je normálne schopná detegovať iba jeden parameter.

Čo je to PCR v reálnom čase?

PCR v reálnom čase môže detekovať amplifikáciu produktov, keď sú produkty syntetizované. S vývojom technológie sa PCR stala veľmi populárnou technikou, najmä na detekciu a identifikáciu baktérií v potravinách. PCR v reálnom čase používa fluorescenčný farbiaci systém a termocykler vybavený schopnosťou fluorescenčnej detekcie.

Aký je rozdiel medzi konvenčnou PCR a PCR v reálnom čase?

• Bežná PCR je časovo náročnejšia, pretože na analýzu amplifikovaných produktov PCR používa gélovú elektroforézu. Naopak, PCR v reálnom čase je menej časovo náročná, pretože dokáže detekovať amplifikácie počas skorých fáz reakcie.

• PCR v reálnom čase zhromažďuje údaje v exponenciálnej rastovej fáze PCR, zatiaľ čo tradičná PCR zhromažďuje údaje v koncovom bode reakcie.

• Konečné výsledky konvenčnej PCR nemusia byť veľmi presné, ale výsledky PCR v reálnom čase sú veľmi presné.

• PCR v reálnom čase je citlivejšia ako konvenčná PCR.

• Bežná PCR má veľmi zlé rozlíšenie, zatiaľ čo PCR v reálnom čase dokáže detekovať veľmi malé zmeny v dôsledku vysokého rozlíšenia.

• Detekcia koncového bodu konvenčnej PCR má krátky dynamický rozsah, zatiaľ čo detekcia PCR v reálnom čase má široký dynamický rozsah.

• Na rozdiel od konvenčnej PCR sa automatizované detekčné techniky nachádzajú v PCR v reálnom čase.

• Bežná PCR je vysoko sofistikovaná a náročná na prácu viac ako PCR v reálnom čase.

• Na rozdiel od PCR v reálnom čase nemôže konvenčná PCR rozlišovať medzi mŕtvymi a živými baktériami.

• PCR v reálnom čase používa fluorescenčný farbiaci systém na detekciu produktov, zatiaľ čo konvenčná PCR používa etidiumbromid a UV svetlo na vizualizáciu pásov v agarózovom gélovom médiu.